1996年11卷2期
真核藻类的病毒和病毒类粒子（ＶＬＰｓ）赵以军石正丽（中国科学院水生生物研究所，武汉４３００７２）（中国科学院武汉病毒研究所，武汉４３００７１）ＶｉｒｕｓｅｓａｎｄＶｉｒｕｓ－ｌｉｋｅＰｅａｒｔｉｃｌｅｓｏｆＥｕｋａｒｙｏｔｉｃＡｌｇａｅＺｈａｏＹｉｊ...
番木瓜环斑病毒株系、分子生物学及其防治研究进展肖火根，范怀忠（华南农业大学植物病毒研究室，广州５１０６４２）ＡｄｖａｎｃｅｓｏｆＲｅｓｅａｒｃｈｏｎｔｈｅＳｔｒａｉｎｓ，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＣｏｎｔｒｏｌｏｆＰａｐａｙａＲｉｎｇｓｐ...
典型的杯状病毒呈球形或近球形，直径30-35 nm，无囊膜，核衣壳呈二十面体对称．由32
个壳粒组成，核衣壳上整齐地排列着暗色中空的杯状结构，这种杯状结构在正二十面体的20
个面及12个顶点各有一个。但兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus．R}mlV)、诺沃克病毒(Norwalk virus，Nv)、戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus．HEV)的衣壳上的这种杯状结构在电镜下并不十分清楚 2· 。杯状病毒的分子量大约为15×10 ，s20 =170～187，氯化铯中的浮密度为1．33～1．4O g／c ，酒石酸钾．甘油中的浮密度为1．29 g／cm ，对乙醚、氯仿和温和性去污剂敏感，DH3～5可将其灭活，高浓度的Mg 能够加快热对杯状病毒的灭活作用 J。杯
状病毒主要引起人和动物的胃肠炎，导致腹污；在动物还可能引起皮肤、粘膜损伤，甚至败血
症。多数病毒不能在体外培养，但圣米吉尔海狮病毒(San Miguel sea 1ion virus，SMSV)、猪水疱疹病毒(Vesicular exanthema virus，VESV)、猫杯状病毒(Feline calicivirus，FCV)可在体外继代，病毒在胞浆中台成和成熟，有时呈晶格状排列ll， ， 。
用炭凝集试验（ＣＡＴ）检测呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ），结果表明该法是一种简便、快速、特异的诊断方法。用ＣＡＴ对１６株ＲＳＶ和８株其它病毒做试验，结果仅ＲＳＶ凝集，而其它病毒均阴性。用该法与细胞培养法检测８３份临床呼吸道感染幼儿鼻咽吸出物，结果ＣＡＴ法阳性率为６９．８８％（５３／８３），细胞培养法为３９．７５％（３３／８３），两者阳性检出率相差极显著。阻断试验证明ＣＡＴ是高度特异的。结果证明ＣＡＴ具有较高的敏感性与特异性，可用于临床ＲＳＶ标本的快速检测。
酶联法是ＨＥＶ感染的主要检测方法，多采用基因表达产物为抗原。近来由于人工合成多肽抗原克服了基因重组抗原制备复杂、非特异结构多、难以纯化的缺点，已广泛用于多种病毒感染的检测。根据已发表的ＨＥＶ氨基酸序列的保守性及亲水性等特点，设计合成了两个多肽ＥＳＰ１和ＥＳＰ２，分别位于ＯＲＦ２和ＯＲＦ３区，以此为混合抗原建立了检测ＨＥＶ抗体的间接ＥＬＬＳＡ法，与市售优质试剂比较，其阳性符合率为９７．７５％，阴性符合率为９９．４３％，总符合率为９８．８６％。该方法灵敏度高、特异性强、安全快速，是检测ＨＥＶ感染和流行病学调查的理想方法。
收集婴幼儿急疹及淋巴系统增生性疾病患者外周血单个核细胞进行体外培养，从７例婴幼儿急疹及２例淋巴系统增生性疾病患者中分离出一种病毒，此病毒能在ＰＨＡ激活的人脐血单个核细胞中传代生长，产生典型ＣＰＥ：形成气球样巨细胞。电镜下观察，感染细胞中可见直径１８０ｎｍ左右，有包膜，疱疹样病毒颗粒；血清学试验证明分离株与ＨＳＶ－１，２、ＨＣＭＶ、及ＥＢＶ无抗原交叉，而与ＨＨＶ－６ＧＳ株间存在抗原一致性；多聚酶链反应表明该分离株ＨＨＶ－６特异性ＤＮＡ阳性；综合以上结果，初步认为该分离株为ＨＨＶ－６。同时还用ｐＣＲ法对所收集的标本直接检测ＨＨＶ－６特异性ＤＮＡ。ＰＣＲ法与病毒分离法相比较，前者ＨＨＶ－６检出率为８８．８％（１６／１８）．后者为３８．９％（７／１８）。
利用ＥＢ病毒转化可产生较高水平人ＩｇＧ和特异性抗２型登革病毒人抗体的Ｈｕ－ＴＬＣ－ＳＣＩＤ小鼠脾细胞，通过免疫组化、免疫荧光和ＰＣＲ法检测转化细胞的人Ｂ细胞表面标志、ＥＢ病毒抗原和ＥＢ病毒基因。结果表明，被转化的Ｈｕ－ＴＬＣ－ＳＣＩＤ小鼠脾细胞能继续产生抗２型登革病毒的特异性人抗体，并具有人Ｂ细胞的、ＳｍＩｇＧ标志及ＥＢ病毒潜伏膜蛋白－１（ＬＭＰ－１）基因，可表达ＬＭＰ－１和ＥＢ病毒核抗原（ＥＢＮＡ）。
应用电子显微技术，对山楂粉蝶核型多角体病毒感染三龄幼虫后，该病毒在体内的形态发生过程及其宿主细胞病理超微结构的变化等进行了观察与分析。结果表明：病毒感染７２～１６８ｈ后，山楂粉蝶幼虫中肠上皮细胞内出现病毒发生基质、核衣壳、套膜、丝状纤维或称前多角体蛋白。病毒粒子、病毒束，以及病毒束嵌入多角体蛋白，装配成完全的病毒多角体。在相应的中肠上皮细胞内，细胞器如线粒体、粗面内质网、核糖体、溶酶体等均发生显著的病理变化。同时还应指出的是内质网呈指纹图谱型，板层体与示髓样小体等膜状结构的病理变化比较特殊。
根据已报道的马铃薯卷叶病毒基因组序列．设计合成一对特异性引物，以马铃薯卷叶病毒中国分离株（ＰＬＲＶ－Ｃｈ）的ＲＮＡ为模板，反转录合成ｃＤＮＡ第一条链，经ＰＣＲ扩增后克隆于ｐＵＣ１９质粒中，进一步用ＰＣＲ鉴定、限制酶切分析和序列分析，结果表明：ＰＬＲＶ－Ｃｈ基因间隔区由１９７个核苷酸组成，与国外报道的荷兰ＰＬＲＶ－Ｎ加拿大ＰＬＲＶ－Ｃ，澳大利亚ＰＬＲＶ－Ａ，苏格兰ＰＬＲＶ－Ｓ各株系核苷酸序列具有很高的同源性，同源率依次为９９％、９８％、９３％、９８％。
对香蕉花叶病广东三个代表分离物的形态和生物学特征进行了较为全面的研究。在六种鉴别寄主上，斑驳类（ＭＭ）和断续条纹类（ＢＳ）分离物侵染较多的寄主种类诱导较为严重的症状，连续条纹类（ＣＳ）分离物侵染能力较弱。电镜观察表明：ＢＳ、ＣＳ和ＭＭ三个代表分离物的粒子呈球状、其粒子直径分别为２２．５、２４．３和２７ｎｍ，纯化的病毒粒子电泳相对迁移率分别为０．７２、０．５６和０．５１，在西葫芦上的增殖速度：不管在子叶或真叶，都是ＭＭ最快、ＢＳ次之、ＣＳ最慢。从西葫芦接种叶运转出接种叶的速度：ＭＭ和ＢＳ相似、ＣＳ明显较慢。在烟草上，三个分离物的运转速度和增殖速度以ＭＭ最快、ＢＳ次之、ＣＳ最慢；而且在烟草上随着接种后时间的延长，三个分离物除ＭＭ维持高浓度的时间较长外，ＢＳ和ＣＳ的都很短。在西葫芦和烟草上提纯产量，ＭＭ类最多、ＢＳ类次之、ＣＳ类最低。
为探索控制水稻条纹叶枯病毒（Ｒｉｃｅｓｔｒｉｐｅｖｉｒｕｓ，ＲＳＶ）设计合成了特异切割该病毒ＲＮＡ保守区及编码病害特异性蛋白（ＤｉｓｅａｓｅＳｐｅｃｉｆｉｃＰｒｏｔｅｉｎ，ＤＳＰ）基因的核酶，核酶基因的长度均为４０个碱基，用化学合成方法合成其正链及与其３＇－末端互补的１５个碱基引物，用ＴａｇＤＮＡ多聚酶合成其互补链。双链ＤＮＡ直接插入克隆载体ＰＧＥＭ３ｚｆ（＋）的Ｓｍａｌ位点。序列测定表明，克隆得到的核酶序列与设计的核酶序列完全一致。经ＳＰ６ＲＮＡ多聚酶体外转录得到核酶ＲＮＡ。当核酶ＲＮＡ与以同样方法转录得到的靶基因ＲＮＡ混合反应，可得到预期结果相同的切割片段，表明两种核酶在体外均具有特异性切割活性。
采用反转录－聚合酶链式反应方法（ＲＴＰ－ＣＲ），在人工合成的引物引导下，扩增出水稻矮缩病毒基因组第一片段（Ｓ１）全长序列及第五片段的部分序列（ＳＳⅢ）．将扩增的片段分别克隆到克隆载体ｐＧＥＭ７Ｚｆ（＋）及ｐＵＣ１９的ｓｍａｌ位点上，并进行了序列测定。在此基础上，利用ｐＣＲ引入的方法将核酶序列引入到Ｓ５Ⅲ片段反义链上以构成反义核酶基因Ｓ５ⅢＲ，将Ｓ１片段５＇端部分序列（Ｓ１－１）及Ｓ５ⅢＲ基因克隆到植物表达载体ｐＲＯＫⅡ上，构建成水稻转化载体ｐＲＯＫ－Ｓ１－１＇及ｐＲＯＫ－Ｓ５ⅢＲ。
根据致病性差异，我国大麦黄花叶病毒（ＢａＹＭＶ）存在若干不同株系，血清学和核酸杂交等技术不能区分这些株系。但还由于致病性不同，各株系的核酸序列间必定存在差异。最近建立的单链构象多态性。聚合酶链反应（ＳＳＣＰ－ＰＣＲ）技术能灵敏而有效地诊断和区分核酸序列间的差异，从而进一步证实我国ＢａＹＭＶ不同株系的分化。
用ＰＣＲ技术，从ＧＡ株马立克氏病病毒（ＭＤＶ）感染的成纤维细胞（ＧＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出ＭＤＶ糖蛋白Ｄ（ｇＤ）抗原基因片段的约１３００ｂｐ编码序列，将该ｐｃＲ扩增的产物于ＥｃｏＲＩ和Ｋｐｎｌ位点克隆到ｐＵＣ１８质粒载体中，在以ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（ｄｉｇ）标记的ｇＤＰＣＲ产物作为探针，进行原位杂交初步筛选到阳性重组质粒克隆，再根据酶切分析筛选到含ＭＤＶｇＤ基因的重组质粒ｐ１８ＭｇＤ。将ｐ１８ＭｇＤ质粒ＤＮＡ用ｄｉｇ标记后，在Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ中，该探针能识别ＭＤＶ基因组ＤＮＡ的ＢａｍＨＩ－Ａ克隆中的Ａ片段ＤＮＡ。酶切位点分析表明，该ｇＤ克隆也和已发表的ＭＤＶ的ＲＢＩＢ株ｇＤ一样，不含有ＥｃｏＲⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＰｓｔⅠ、ＳｍａⅠ、ｐｖｕⅡ等酶切位点。证明该重组质粒是ＭＤＶｇＤ克隆。
棉铃虫核型多角体病毒ｍＲＮＡ的快速制备与体外翻译吴金炉，刘润忠，张友清（中国科学院武汉病毒研究所，武汉４３００７１）关键词棉铃虫核型多角体病毒，ｍＲＮＡ，快速制备，体外翻译，ＥＬＩＳＡ在昆虫杆状病毒ｍＲＮＡ的结构与功能研究方面，主要是以ＡｃＮＰＶ为研...
韭菜病毒分离物初步鉴定房德纯，王振东，佟成富，陆庆轩（沈阳农业大学植保系，沈阳１１０１６１）（辽宁省风沙地改良利用研究所，阜新１２３０００）（沈阳市园林科学研究院，沈阳１１００１５）关键词韭菜病毒病，毒原鉴定，韭菜萎缩病毒１９９３年在辽宁省阜新市韭菜...
39卷第1期 (2024年2月)
ISSN 1674-0769
EISSN 1995-820X
CN 42-1760/Q
主编: 石正丽
影响因子: 5.5*
*源于2022年JCR
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