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Genome Characteristics and Evolution of Pseudorabies Virus Strains in Eastern China from 2017 to 2019
Xiaofeng Zhai, Wen Zhao, Kemang Li, Cheng Zhang, Congcong Wang, Shuo Su, Jiyong Zhou, Jing Lei, Gang Xing, Haifeng Sun, Zhiyu Shi, Jinyan Gu
当前状态: , doi: 10.1007/s12250-019-00140-1
[摘要] [PDF] Springerlink
Since late 2011, outbreaks of pseudorabies virus (PRV) have occurred in southern China causing major economic losses to the pig industry. We previously reported variant PRV may from recombination in China that could be the source of continued epidemics. Here, we analyzed samples from intensive pig farms in eastern China between 2017 and 2019, and sequenced the main glycoproteins (gB, gC, gD, and gE) to study the evolution characteristics of PRV. Based on the gC gene, we found that PRV variants belong to clade 2 and identified a founder effect by the PRV epidemic process. In addition, we detected inter- and intra-clade recombination, in particular, inter-clade recombination in the gB gene of strains FJ-ZXF and FJ-W2, which were recombinants with clade 1 strains. Specific amino acid changes and positively selected sites possibly associated with functional changes were also observed. The characteristics of PRV emergence in China necessitate continuous monitoring and development of vaccines capable of providing immunity against specific PRV variants.

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Perspective
Boosting Global Yellow Fever Vaccine Supply for Epidemic Preparedness: 3 Actions for China and the USA
Daniel R. Lucey, Kristen R. Kent
2019, 34(3): 235-239.   doi: 10.1007/s12250-019-00129-w
[HTML全文] [PDF 1027KB] Springerlink
Cetacean morbillivirus: A Land-to-Sea Journey and Back?
Giovanni Di Guardo, Sandro Mazzariol
2019, 34(3): 240-242.   doi: 10.1007/s12250-019-00128-x
[HTML全文] [PDF 349KB] Springerlink
Research Article
流行性乙型脑炎疫苗接种儿童的血清抗体流行度及血清保护作用的衰减规律
王然, 谢吕, 高娜, 范东瀛, 陈辉, 王培刚, 周红宁, 安静
2019, 34(3): 243-252.   doi: 10.1007/s12250-019-00099-z
[HTML全文] [PDF 835KB] Springerlink ESM
自流行性乙型脑炎广泛接种以来,中国的乙脑发病率显著下降。本研究中,我们针对接种减毒活疫苗SA14-14-2的儿童群体,阐释该人群血清中抗体流行度及血清保护作用的维持和衰减规律。研究地点在云南省昭通市,研究人群为3–10岁的疫苗接种儿童。同时采用酶联免疫吸附试验和噬斑减少中和试验确定抗乙脑抗体的血清阳性率。在加强免疫后的最初0.5–1.5年中,儿童的血清阳性率高达82%,随后开始持续下降,血清阳性率的衰减与接种后的时长呈线性关系。同样地,中和抗体效价亦随接种后时间而逐渐下降,且该效价与血清在小鼠体内的保护作用呈正相关。因此,中和抗体在抗病毒过程中发挥重要作用,中和抗体效价是评估疫苗诱导的血清在体保护作用的重要参数。本研究揭示了乙脑疫苗接种后,血清抗体流行度的持续和衰减规律,有助于阐明乙脑的发病机制。
EB病毒通过“Cell-in-cell”方式感染胃癌细胞的早期模式
乐文星, 朱美娟, 左埒莲, 辛舒雨, 张靖, 刘灵芝, 李燊, 党委, 张四维, 谢艳, 朱昉修, 卢建红
2019, 34(3): 253-261.   doi: 10.1007/s12250-019-00097-1
[HTML全文] [PDF 1003KB] Springerlink ESM
EB病毒(EBV)是一种重要的人类双股DNA病毒,与多种恶性肿瘤相关,包括约10%的胃癌。EBV如何进入上皮细胞是一个令人感兴趣的研究项目。据最近的报道,“cell-in-cell”是EBV进入鼻咽上皮细胞的有效感染方式。本研究探讨了用这种模式对EBV感染胃上皮细胞的可行性以及宿主炎症反应的动态变化。将病毒基因组中含有GFP标签的EBV阳性淋巴母细胞系Akata与胃上皮细胞(GES-1)共培养,在荧光显微镜和电子显微镜下观察感染情况。采用qPCR和Western-blotting检测了几个细胞因子和炎症因子的表达。结果表明,EBV可以通过“cell-in-cell”方式进入胃上皮细胞,但由于宿主的抵抗而未能完全成功。IL-1β,IL-6和IL-8在宿主细胞对感染的反应中起主要作用。NF-κB和HSP70的激活对宿主的抗病毒反应也是必需的。结果提示,胃上皮细胞可能通过炎症和天然免疫反应在病毒通过“cell-in-cell”方式入侵的早期发生强大的防御作用。
Saffold病毒(Saffold virus-Penang)的2B和3C蛋白,而不是L蛋白,会诱导Hep-2和Vero细胞发生凋亡
Yishi Xu, Carla Bianca Luena Victorio, Tao Meng, Qiang Jia, Yee-Joo Tan, Kaw Bing Chua
2019, 34(3): 262-269.   doi: 10.1007/s12250-019-00116-1
[HTML全文] [PDF 1594KB] Springerlink
我们以前的研究成果表明,Saffold病毒(SAFV)诱导数种啮齿类动物和灵长类动物的细胞系发生凋亡(Xu Y. et al.,2014)。然而,诱导细胞凋亡的SAFV病毒蛋白还缺乏研究。在本研究中,我们把SAFV的病毒蛋白逐一转染到HEp-2和Vero细胞以检测其诱导细胞凋亡的能力,并发现2B和3C蛋白质有促进细胞凋亡的作用。进一步研究表明,2B蛋白的跨膜结构对于2B蛋白的凋亡活性和2B蛋白四聚体的形成是必要的。我们的研究为寻求SAFV在不同细胞系中诱导细胞凋亡的机制提供了线索,开辟了研究病毒蛋白(2B,3C蛋白)的新方向,并为将来探索SAFV(包括其相关无法培养的基因型)和多发性硬化症的可能联系提供研究平台。
树鼩原代真皮成纤维细胞对人巨细胞病毒感染的易感性
董书维, 焦玲帅, 杨铭, 陈一波, 段莹亮, 赵飞, 张阿梅, 刘丽, 罗敏华, 夏雪山
2019, 34(3): 270-277.   doi: 10.1007/s12250-019-00106-3
[HTML全文] [PDF 2693KB] Springerlink ESM
作为引起新生儿畸形和移植失败的一种常见病原物,人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)具有严格的种属特异性,该特性阻碍致病机制研究所需动物模型的建立。目前,HCMV跨物种感染机制尚不清楚并且没有非人细胞模型支持其复制。中缅树鼩(Tupaia belangeri chinensis)是一种小型实验动物,与灵长类亲缘关系接近。我们检测了树鼩原代真皮成纤维细胞(primary tree shrew dermis fibroblasts,TSDF)对HCMV感染的易感性。利用表达GFP的HCMV进行感染,被感染细胞中表达绿色荧光蛋白以及病毒蛋白IE1、UL44和pp28。在96 hpi,TSDF上清中滴度可达103 PFU/mL而人原代包皮成纤维细胞上清滴度为104 PFU/mL。我们的研究结果意味着TSDF为HCMV感染的半容许性细胞。TSDF模型可被进一步用于HCMV跨物种感染关键因子的研究。
HSV-2编码的miRNA-H4靶向作用于CDKL2和CDKN2A调控HeLa细胞周期进展及Act-D诱导的细胞凋亡
赵阳, 杨晶晶, 刘岩, 樊建勇, 杨慧兰
2019, 34(3): 278-286.   doi: 10.1007/s12250-019-00101-8
[HTML全文] [PDF 906KB] Springerlink ESM
单纯疱疹病毒2型(HSV-2)的潜伏相关转录本(LAT)所编码的微小RNA(miRNAs)在病毒感染的潜伏期及急性期均发挥重要作用。本研究在Hela细胞中转染HSV-2-miRNA-H4前体过表达载体,以探讨其潜在的生物学功能,并验证病毒miRNAs作用于细胞的可能靶点。结果表明,miRNA-H4-5p可逆转放线菌素D(Act-D)诱导的细胞凋亡,促进细胞周期进展,但miRNA-H4-3p无明显作用。生物信息学分析、荧光素酶报告分析、定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting显示,miRNA-H4-5p可与细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A(CDKN2A)和细胞周期蛋白依赖性激酶样2(CDKL2)的3’-非翻译区(UTR)结合并负性调控其表达,并且证实了这两个靶向基因与细胞凋亡和细胞周期有关。此外,在感染HSV-2的HeLa细胞中,我们检测到CDKN2A和CDKL2的表达显著降低,miRNA-H4-5p对这两个靶基因具有负调控作用。我们的研究结果表明,病毒miRNA在调控宿主细胞基因表达方面发挥着重要作用,参与细胞凋亡和细胞周期进程,在HSV-2感染中可重塑细胞环境,为疱疹病毒编码的microRNA在病原体与机体之间的相互作用提供进一步的信息。
中国来源噬菌体控制肯尼亚胡萝卜软腐果胶杆菌导致的土豆软腐病研究
MuturiPeter, 余军平, MainaAlice Nyambura, KariukiSamuel, MwauraFrancis B., 危宏平
2019, 34(3): 287-294.   doi: 10.1007/s12250-019-00091-7
[HTML全文] [PDF 1162KB] Springerlink ESM
软腐病严重影响土豆产量和品质,导致重大的经济损失。本研究目的在于分离胡萝卜软腐果胶杆菌的烈性噬菌体,并研究其控制土豆软腐病的可行性和方法。采用肯尼亚来源的胡萝卜软腐果胶杆菌作为宿主菌,从武汉地区的水体和土壤中成功分离到了11株烈性噬菌体。这11株噬菌体具有很好的广谱性,能裂解实验室保存的20株胡萝卜软腐果胶杆菌。其中一株噬菌体Wc5r还能裂解黑茎病菌和抗其它噬菌体的胡萝卜软腐果胶杆菌。采用土豆片和全土豆作为软腐病感染模型,发现噬菌体的滴度和使用时间对于软腐病的控制效果影响较大,并且噬菌体混合制剂比单一的噬菌体具有更好的控制效果。在感染前喷洒足够浓度的噬菌体,能达到100%的预防感染效果。在感染后,越早时间喷洒噬菌体,控制效果越好。这些结果为研制控制土豆软腐病的噬菌体制剂提供了理论和应用基础。
香蕉束顶病毒运动蛋白B4被释放耦联寄主因子的功能性多肽的切割是毒力所需的
庄军, 林文武, 科茨·克里斯托弗, 尚鹏祥, 魏太云, 吴祖建, 谢联辉
2019, 34(3): 295-305.   doi: 10.1007/s12250-019-00094-4
[HTML全文] [PDF 5283KB] Springerlink ESM
香蕉束顶病毒(BBTV)严重危害着世界香蕉生产。BBTV编码的蛋白B4是个致病因子。但是,其相关的分子机制尚未知。本研究中,我们发现功能性多肽可能通过蛋白酶切割从蛋白B4释放出来。位点特异性突变暗示着蛋白B4的功能性切割为B4介导植物矮化和败育的病状所必需。B4释放出来的C端片段能靶向偶联RuBP羧化酶大亚基(RbcL)和涉及蛋白合成的延伸因子2(EF2)。这样,从B4(也是一前体)游离出来的多肽可作为影响BBTV病原与植物寄主互作的非经典性修饰子。
H1N1流感病毒血凝素异嗜性抗原表位的定位研究
郭春艳, 张海祥, 张军军, 孙丽君, 李慧瑾, 梁导艳, 封青, 李研, 冯杨萌, 谢鑫, 胡军
2019, 34(3): 306-314.   doi: 10.1007/s12250-019-00100-9
[HTML全文] [PDF 1043KB] Springerlink ESM
前期研究发现两株抗流感病毒血凝素(HA)单克隆抗体(A1-10和H1-84)与人脑组织交叉反应。因此,推测HA蛋白与人脑组织之间存在异嗜性抗原表位。但是这两株抗体识别HA上的异嗜性抗原表位的信息不是很清楚。在本研究中,采用间接ELISA方法检测两株单抗(A1-10和H1-84)与5种不同亚型流感病毒(2009年H1N1、季节性H1N1和H3N2、禽流感H5N1和H9N2)的反应性;在GenBank数据库中查找两株单抗共同识别抗原的氨基酸序列,应用DNAMAN软件按照这几种抗原的共同氨基酸序列设计并合成多肽;然后将不同的多肽与单抗A1-10和H1-84进行阻断反应以确定异嗜性抗原表位,并利用PyMOL软件分析定位的异嗜性抗原表位在HA晶体结构中的分布;应用丙氨酸扫描替换实验确定mAb A1-10及H1-84识别异嗜性抗原表位上的关键氨基酸位点;应用分子克隆方法调取2株抗体的轻重链可变区基因,分析2株抗体的差异。研究结果显示,与人脑组织结合的单抗A1-10和H1-84均识别HA头部的异嗜性表位LVLWGIHHP191-199;而且两株mAbA1-10和H1-84识别的关键氨基酸位点分别为L191,V192,L193,W194,I196,H197和V192,L193,W194,I196,P199;并且其轻重链可变区存在明显差异。所以,本研究定位的异嗜性抗原表位不仅为流感病毒感染后引发神经系统疾病的发生机制提供参考资料,也可为流感的防控提供研究数据。
天然化合物和厚朴酚抑制1型单纯疱疹病毒的复制
刘帅, 李龙, 谭令兵, 梁小珍
2019, 34(3): 315-323.   doi: 10.1007/s12250-019-00104-5
[HTML全文] [PDF 1757KB] Springerlink
和厚朴酚是一种从木兰花分离的天然化合物,有抗病原感染和抗肿瘤等各种生物学功能。但是和厚朴酚在抗病毒感染上的作用目前研究得还不是很多。我们实验室的研究发现,和厚朴酚对1型单纯疱疹病毒感染时进入细胞这个过程没有作用,但是能抑制1型单纯疱疹病毒DNA的复制,病毒基因的表达以及新感染性病毒颗粒的产生。和厚朴酚和临床药阿昔洛韦一起能显著增强对1型单纯疱疹病毒的抑制。基于和厚朴酚没有明显的副作用,它能作为一个潜在可开发的新药用于抗Ⅰ型单纯疱疹病毒感染。
干扰素作为猪流感疫苗的粘膜佐剂研究
刘丽蓉, 范文辉, 张鹤, 张爽, 崔亮, 王萌, 白晓园, 杨文贤, 孙蕾, 杨利敏, 刘文军, 李晶
2019, 34(3): 324-333.   doi: 10.1007/s12250-019-00102-7
[HTML全文] [PDF 971KB] Springerlink ESM
干扰素是一种由多种细胞在病毒感染过程中产生的天然蛋白,激活细胞内多种功能基因的转录,调节多种信号通路的协同作用,介导抗病毒活性、免疫调节、细胞生长等多种生物学功能。然而,干扰素在家畜体内的临床研究还很缺乏。在这项研究中,重组猪干扰素(PoIFNα)作为佐剂,结合灭活流感病毒,通过鼻腔注入流行猪接种疫苗。动物试验检测PoIFNα对粘膜免疫的激活水平。我们发现低剂量的组合PoIFNα和灭活流感病毒较显著调控免疫调节细胞因子的表达如IL-2,IL-18,IFN-γ,IL-6,and IL-10,这表明干扰素能够激活粘膜先天免疫反应。此外,低剂量PoIFNα可以显著增强细胞因子如CCR9和CCR10(P < 0.001),通过ELISA和IFA方法检测显示,干扰素可诱导更高水平的抗体(P < 0.05)。利用H1N1病毒进行攻毒保护后显示,结合灭活的流感病毒,干扰素可以缓解猪病毒感染的早期的临床症状。这些研究显示预防猪流感病毒,低剂量PoIFNα作为一个潜在的粘膜佐剂。
Letter
H7N9病毒血凝素胞质尾端广谱抗原表位的鉴定
刘曦, 丁立, 袁静, 廖健, 段炼, 汪文斐, 谭卫国, 余卫业, 周伯平, 陈心春, 杨争
2019, 34(3): 334-337.   doi: 10.1007/s12250-019-00110-7
[HTML全文] [PDF 1751KB] Springerlink
目的研究H7N9病毒血凝素HA7的线性抗原表位。方法根据HA7全长序列合成线性多肽,利用H7N9患者血浆进行多肽微阵列酶联免疫吸附试验(ELISA),筛选抗原表位。从患者血浆总IgG纯化出候选抗原表位的特异性抗体,用于检测抗原表位的免疫原性,研究该表位在病毒颗粒中的可能位置及其序列保守性。结果我们发现HA7的胞质尾段(HA7-CT)序列为KNGNMRCTICI,是一个新型抗原表位,在合成的多肽中免疫原性最强。HA7-CT特异性IgG滴度与血浆中和效价呈正相关。此外,经序列比对分析表明,CT在流感病毒中高度保守的,在H7、H3和H9中具有较强的免疫原性。结论HA-CT可作为潜在抗原表位用于研发流感病毒的广谱抗体。
检测蜱传脑炎病毒的反转录-重组酶聚合酶分析
贾佳, 李裕昌, 吴晓燕, 张森, 户义, 李靖, 姜涛, 康晓平
2019, 34(3): 338-341.   doi: 10.1007/s12250-019-00105-4
[HTML全文] [PDF 708KB] Springerlink ESM
蜱传脑炎病毒在中国广泛传播,可引起严重的脑炎疾病。目前,免疫荧光分析和荧光定量PCR可以用于检测TBEV感染。但是这些方法检测时间较长,常需要数小时完成实验。因此,急需开发TBEV快速检测方法。在本研究中,我们开发了基于重组酶-聚合酶(RPA)的快速核酸分析技术用于检测TBEV病毒。分别提取假病毒(VLP)、体外培养的TBEV森张株和牡丹江株核酸进行灵敏度评价,VLP的最低检测限为10拷贝/反应,病毒提取核酸的最低检测限为0.1PFU/反应。用黄病毒其他成员病毒(登革病毒,西尼罗病毒,乙型脑炎病毒,寨卡病毒)的核酸进行特异性检测,未出现交叉反应。灵敏性和特异性的评价结果与荧光定量PCR检测相似。提取15份非TBEV病人血清,提取核酸后分别进行RT-RPA和实时RT-PCR检测,结果均为阴性,表明RT-RPA检测临床样本的特异性好;提取20份TBEV感染病人的脑积液和血清样本进行分别RT-RPA和实时RT-PCR检测,16份样本结果一致,4份RT-RPA阴性,而RT-PCR弱阳性,CT值大于35,表明该RT-RPA的检测灵敏性稍低于RT-PCR。但RT-RPA操作简便,反应时间短,不需要大型昂贵的仪器,在现场病原体快速筛查中,将具有独特价值。
尿液里的裂谷热和黄热病毒:潜在的感染源
李萌, 王蓓蓓, 李力强, GaryWong, 刘映霞, 麻锦敏, 利建东, 卢洪洲, 梁米芳, 李昂, 张秀清, 毕玉海, 曾辉
2019, 34(3): 342-345.   doi: 10.1007/s12250-019-00096-2
[HTML全文] [PDF 1063KB] Springerlink ESM
黄热病病毒(YFV)和裂谷热病毒(RVFV)是重要的媒介传播病原体,均起源于非洲。现在,这两种病毒在全球蔓延,对公众健康构成更广泛的威胁。最近的研究表明,血液和尿液样本中可以检测到YFV,并且从尿样中分离出了YFV活病毒。同时尿液样本中检测到了RVFV,但尚未有RVFV活病毒分离的报道。本文比较了患者血清和尿液样本中YFV的检测窗口。此外,从临床样品中分离出了YFV和RVFV活病毒,并通过定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和测序进行了验证。尿液中的YFV可在发病后第32天仍可检出,这个检测窗口期比其他YFV感染报道的更长。总体而言,我们的数据显示尿液可被视为临床检测YFV、RVFV和其他媒介传播病原体的替代样品,方便可取、无需对人体进行创伤性取样;可以改善诊断,帮助监测这些新发或再发虫媒病毒的流行和传播,并减少通过尿液传播病毒的风险。