Virologica Sinica

杆状病毒p10基因及蛋白结构与功能的研究进展

1998, 13(3): 185

[摘要] [PDF 251 KB]

ｐ１０蛋白是杆状病毒复制晚期大量表达的一种蛋白质，因其分子量约为１０ｋＤａ而得名。大量表达的ｐ１０蛋白在杆状病毒感染的细胞核和细胞浆中形成纤维状结构。研究表明，ｐ１０蛋白与杆状病毒感染细胞的裂解及多角体释放有关，同时参与多角体囊膜的形成，维持多角体的...

随机RNA库筛选技术的发展与展望

王冰, 江红, 柯丽华

1998, 13(3): 192

[摘要] [PDF 241 KB]

随着分子生物学的发展，人们对体外分子进化有了进一步认识，把组合化学策略与模拟进化思想结合起来，构建了由各种各样合成分子组成的数目庞大的组合库（包括多肽、氨基酸、蛋白质、寡核苷酸），这些组合库的构建及筛选不仅适合于筛选药物先导化合物，而且适用于研究、诊...

HIV-1长末端重复序列对重组痘苗病毒表达Gag蛋白的影响

毛春生, 金宁一, 佟明华, 郭军庆, 王秀清, 郭志儒, 殷震

1998, 13(3): 207

[摘要] [PDF 269 KB]

将系列缺失的ＨＩＶ１长末端重复序列（ＬＴＲ）和全长的ｇａｇＯＲＦ置于痘苗病毒载体中，经同源重组和血球吸附试验，成功地构建了６株重组痘苗病毒。免疫印迹和免疫酶试验检测均表明，６株重组病毒的Ｇａｇ蛋白表达量因ＬＴＲ不同而有明显差异，表明ＨＩＶ１的ＬＴＲ及其下游基因置于痘病毒启动子控制下，在痘苗病毒中表达时有下述特点：（１）不同的痘苗病毒启动子与全长ＬＴＲ相互作用，对ｇａｇ基因表达有显著不同的调控效果；（２）ＮＲ序列对Ｇａｇ蛋白表达没有明显影响；（３）ＥＮ序列不能被重组痘苗病毒表达系统识别；（４）ＴＡＲ序列可提高Ｇａｇ蛋白的表达量；（５）Ｕ５区及下游非翻译序列不影响Ｇａｇ蛋白的表达。

大规模区带离心纯化Vero细胞乙脑疫苗

石慧颖, 丁志芬, 赵敏, 庞成华, 杨抗抗, 李荆

1998, 13(3): 213

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本文报道一种适合疫苗生产的大规模纯化Ｖｅｒｏ细胞乙脑疫苗的方法。原疫苗经适当浓缩和去除ＤＮＡ处理后，用不连续蔗糖梯度（３６％和６０％）。３２６００ｇ，速率区带离心４ｈ。纯化后疫苗的效力比中国参考疫苗高出６倍以上，补体结合抗原比中国参考疫苗高４～８倍。总蛋白含量低于３０ｇ／ｍＬ，牛血清含量降至０．５ｇ／ｍＬ以下，细胞残余ＤＮＡ低于１００ｐｇ／０．５ｍＬ。用此法连续制备三批纯化疫苗，其纯度和效力均高于日本鼠脑纯化疫苗。此法对于制备其它纯化Ｖｅｒｏ细胞疫苗也具有一定的参考意义。

丙型肝炎病毒高变区基因变异特点初探

潘文胜, 王海涛, 汪涛, 郭华章, 骆抗先

1998, 13(3): 221

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对两例ＨＣＶＲＮＡ持续阳性者分三个时间点随访五年，测定了ＨＣＶ的高变区基因序列，每个时间点平均测定２８个克隆，总共测定了１６８个克隆。研究发现ＨＣＶ高变区基因变异有五个明显特点：（１）变异程度大，高变区至少有８９％的核苷酸位点都可能发生变异；（２）变异形式多样，除常见的替代突变外，缺失突变（缺失１、２或３个核苷酸）的克隆数占总克隆数的２２．５％；（３）优势克隆明显，即有若干个克隆高变区的核苷酸和氨基酸序列相同；（４）类似株现象严重；（５）变异幅度大。该研究说明ＨＣＶ高变区基因变异具有高度复杂多样性。

GC32细胞对三种虫媒病毒的敏感性研究

章域震, 黄文丽, 侯宗柳, 袁庆虹

1998, 13(3): 225

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用胃癌细胞株ＧＣ３２，对乙型脑炎、基孔肯雅、兰加特病毒进行敏感性研究。并用ＢＨＫ２１细胞作对照，发现ＧＣ３２细胞对两种病毒的敏感性与对照细胞ＢＨＫ２１极为接近。ＢＨＫ２１和ＧＣ３２细胞对基孔肯雅、乙型脑炎和兰加特的免疫荧光实验，于感染后４８ｈ或７２ｈ都出现＋＋＋＋＋＋＋的阳性结果。两种细胞对基孔肯雅和乙型脑炎病毒都形成空斑，ＢＨＫ２１细胞对基孔肯雅和乙型脑炎病毒的空斑形成单位分别为５．６５和５．３６；ＧＣ３２对基孔肯雅和乙型脑炎病毒的空斑形成单位分别为６．４８和５．６１。实验表明，ＧＣ３２细胞可以作为有关病毒实验的理想细胞株。

1992～1994年HIV-1国际流行株和云南株膜蛋白V3区氨基酸共有序列比较

王斌, 鲁晓晴, 邵济钧, 邵一鸣, 曾毅

1998, 13(3): 230

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对１９９２～１９９４年间１６个云南ＨＩＶ１株膜蛋白基因Ｖ３区进行了ＤＮＡ序列测定，经计算机ＤＮＡＳＩＳ及ＰＲＯＳＩＳ软件进行同源性分析，得出其相应的氨基酸共有序列ＹＮＶ３和两组共有序列ＹＮＶ３Ａ和ＹＮＶ３Ｂ，计算了ＹＮＶ３中每个氨基酸的保守性。分别将ＹＮＶ３Ａ和ＹＮＶ３Ｂ与世界各地的ＨＩＶ１代表株的相应序列进行了同源性比较。结果表明，ＨＩＶ１云南株膜蛋白Ｖ３区氨基酸共有序列ＹＮＶ３中每个氨基酸的平均变异度为７．６６％。两组共有序列ＹＮＶ３Ａ和ＹＮＶ３Ｂ，分别与ＨＩＶ１美欧株及泰国流行株Ｂ亚群相应序列有较高同源性。这一结果提示，在进化上云南瑞丽ＨＩＶ１流行毒株间有非常密切的关系，在这一时期该地区的流行毒株以ＨＩＶ１美欧株、泰国株Ｂ亚群及其衍生株为主。

人类疱疹病毒6型感染细胞免疫学特性研究

赵蓓, 季晓辉, 赵有宏, 丁如予, 周瑶玺

1998, 13(3): 236

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采用间接免疫荧光法、ＡＰＡＡＰ法及ＭＴＴ法，研究了人类疱疹病毒６型（ＨＨＶ６）中国南京地方株ＣＮ５感染细胞病毒抗原表达的形态学和动力学特征、ＣＤ抗原表达阳性细胞百分率的变化及ＰＨＡ诱导的细胞增殖反应的改变。结果显示，ＣＮ５感染脐血单个核细胞（ＣＢＭＣｓ）后８～１２ｈ即可在细胞内检出病毒抗原，至接种后４８ｈ，病毒抗原阳性细胞可达３６％；ＣＮ５感染ＣＢＭＣｓ和成人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）后可引起两者ＣＤ３阳性细胞减少、ＣＤ４阳性细胞增多，而对ＣＤ２、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ阳性细胞百分率未见明显影响；ＣＮ５感染细胞裂解液对ＰＨＡ诱导的ＰＢＭＣｓ增殖反应具有抑制作用，这种抑制作用与该裂解液的蛋白浓度之间呈一剂量依赖关系，且可被ＨＨＶ６抗血清所逆转。

家蚕BmN细胞的微载体培养及HBeAg的高效表达

邓小昭, 刁振宇, 朱应, 何亮, 乔仁良, 周宗安, 张林元

1998, 13(3): 237

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选择微载体Ｃｙｔｏｄｅｘ３对家蚕ＢｍＮ（从ＳｉｌｋｗｏｒｍＢｏｍｂｙｘｍｏｒｉ获得的细胞系）细胞进行高密度培养，并获得成功。观察了家蚕ＢｍＮ细胞在微载体Ｃｙｔｏｄｅｘ３上的贴壁分布，研究了不同接种浓度与微载体浓度时细胞的生长情况，并筛选出最佳的技术参数。在１０００ｍＬ滚瓶中用微载体Ｇｙｔｏｄｅｘ３培养家蚕细胞，在合适的培养条件下（细胞接种浓度３．６１０５细胞／ｍＬ、微载体浓度５ｇ／Ｌ），５ｄ后，细胞的终密度达到２．８１０６细胞／ｍＬ，细胞增长指数为７．９。在细胞指数生长期（传代后４８～６０ｈ）用载有ＨＢｅＡｇ基因的重组病毒（ｒＢｍＨＢｅ）接种（感染量为０．４ＰＦＵ／细胞），５ｄ后，培养上清中ＨＢｅＡｇ滴度为１∶９．６１０４，是用方瓶静止培养的家蚕细胞表达量的３倍。

金鱼生长激素Ⅱ基因在杆状病毒中的表达

林广云, 龙綮新, 黄安林, 庞义, 余奇理

1998, 13(3): 250

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以ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３为转移载体，将编码金鱼生长激素Ⅱ的ｃＤＮＡ插入粉纹夜蛾核型多角体病毒（ＴｎＮＰＶ）基因组中，构建了重组病毒株ＴｎＮＰＶＳＸ＋ｇｆＧＨⅡ４６。该毒株能在草地贪夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）离体培养细胞及银纹夜蛾（Ａｇｙｒｏｇｒａｍｍａａｇｎａｔａ）幼虫中表达金鱼生长激素基因。蛋白免疫印迹表明，表达的生长激素蛋白分子量为２２．５ｋＤａ，与理论计算值相符，且表达的生长激素可分泌到感染细胞的培养基及虫体血淋巴中。ＲＩＡ结果表明，表达产物与天然的生长激素有相似的免疫特性，重组病毒在感染细胞９６ｈｐｉ所表达的生长激素达到最高水平，平均每１０５个细胞可在细胞培养基中检测到金鱼生长激素Ⅱ达８６．７４ｎｇ；平均每克干虫可产生金鱼生长激素Ⅱ２１４ｇ。

棉铃虫核型多角体病毒凋亡抑制基因对p35基因失活病毒的功能拯救

王业富, 齐义鹏, 朱应, 李小峰, 李志达

1998, 13(3): 256

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野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）能感染棉铃虫细胞，不引起细胞凋亡，用ＬａｃＺ基因使ＡｃＮＰＶ凋亡抑制基因ｐ３５插入失活，得到缺陷病毒Ａｃｐ３５Ｚ能迅速引起棉铃虫细胞凋亡，但缺陷病毒本身不能复制。用ＡｃＮＰＶ即早期基因ＩＥ１启动子带动棉铃虫杆状病毒（ＨａＮＰＶ）ｐ３５基因在棉铃虫细胞中瞬时表达，能拯救ｐ３５基因失活病毒Ａｃｐ３５Ｚ复制。通过Ｘ－ｇａｌ显色反应和ｄｏｔＥＬＩＳＡ分别检测到了半乳糖苷酶的活性和ｐ３５基因的表达，证明了所克隆的ＨａＮＰＶｐ３５基因不仅是一个凋亡抑制基因，也是一个与杆状病毒复制相关的基因，它的瞬时表达能支持Ａｃｐ３５Ｚ在棉铃虫细胞中复制。

烤烟栽培品种G28和K326抗黄瓜花叶病毒的遗传转化

陈元生, 肖火根, 张曙光, 范怀忠

1998, 13(3): 262

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采用根癌农杆菌介导的叶盘转化法，将ＣＭＶＢＳ（香蕉株系）的ＣＰ基因转入广东烤烟栽培品种Ｇ２８和Ｋ３２６，获得了再生转基因烟株。在卡那霉素（Ｋｍ）１００ｇ／ｍＬ浓度下转化体叶片分化形成愈伤组织；用ＰＣＲ和ＤＡＳＥＬＩＳＡ分析，结果证明ＣＰ基因已整合到转化烟株的染色体中，并得到不同程度的表达。利用广东地区香蕉、烟草和番茄上的ＣＭＶＢＳ、２７和３７株系，采用机械接种和蚜虫传毒法分别进行攻毒试验，结果证明转基因烟株对这三个株系的攻击都表现出明显的抗病能力，其抗性程度与烟株中的ＣＰ表达量呈正相关。采用五种攻毒浓度处理，发现随着攻毒浓度的增加，转基因烟株的抗病能力逐渐减弱。

中国对虾杆状病毒基因克隆及探针制备与检测

石正丽, 黄灿华, 陈棣华

1998, 13(3): 267

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从收集的中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）病虾样品中分离到一种杆状病毒，经负染在电镜下观察，完整病毒粒子大小为１１０２８０～３２０ｎｍ。病毒核酸经ＥｃｏＲＩ酶切，克隆到ｐＵＣ１８质粒上，经筛选得到两个克隆Ｌ４６、Ｍ１３，克隆片段分别为２．１４ｋｂ和３．５８ｋｂ。将这两个基因片段和对虾白斑综合征杆状病毒（ＷｈｉｔｅＳｐｏｔＳｙｎｄｒｏｍｅＢａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ，简称ＷＳＳＶ）基因克隆片段Ａ２６制备探针，共同用点杂交法对我国沿海地区的病虾样品进行检测，以了解我国沿海地区对虾杆状病毒的分布，并确定中国对虾杆状病毒与ＷＳＳＶ的同源性。