1998年13卷4期
我们曾报道过弹状病毒的基因组结构研究的新进展，本文将对弹状病毒的结构蛋白及其功能区、转录与复制和核衣壳化研究的新进展作进一步的报道。根据弹状病毒在细胞内复制及装配的位置，可分为两个亚组。第一亚组其复制和装配在细胞质内，水泡性口炎病毒（ＶＳＶ）为其代表...
大麦黄矮病毒（ＢａｒｌｅｙＹｅｌｏｗＤｗａｒｆＶｉｒｕｓ，ＢＹＤＶ）是黄矮病毒组（Ｌｕｔｅｏｖｉｒｕｓ）中的一员。它只能通过蚜虫传播，广泛流行于北美、欧洲、东亚的大麦产区。大麦黄矮病主要引起大麦矮化，抑制分蘖，减少穗数，造成不孕以至不能结实。除大麦外...
由于ＨＰＶ１６Ｅ６蛋白能诱导机体保护性免疫反应，可作为基因治疗的靶抗原。用杆状病毒昆虫细胞表达系统制备了ＨＰＶ１６Ｅ６基因工程蛋白，拟用于宫颈癌细胞系小鼠模型抗癌的免疫治疗。用ＰＣＲ技术从ＨＰＶ１６基因组中扩增获得转化基因Ｅ６的完整ＯＲＦ，按ＴＡ策略将其克隆到自行制备的杆状病毒转移载体ｐＶＬ１３９３Ｔ尾载体中，置于杆状病毒ＡｃＭＮＰＶＰｏｌｈ晚期启动子控制之下，用此重组转移质粒ｐＶＬ１３９３Ｅ６与杆状病毒ＤＮＡ共转染昆虫细胞Ｓｆ９，经噬斑筛选获得带有编码Ｅ６蛋白基因的重组杆状病毒株，并在昆虫细胞Ｓｆ９中表达为非融合性Ｅ６蛋白。ＳＤＳＰＡＧＥ电泳分析其分子量约为１８ｋＤ，免疫印迹实验表明，此重组蛋白能被兔抗ＨＰＶ１６Ｅ６抗体所识别。
以脾指数、病毒抗原阳性细胞、血清ＩｇＧ和脾细胞对刀豆蛋白Ａ的刺激应答为指标，用ＬＰＢＭ５Ｃ５７ＢＬ／６鼠艾滋病模型评价了虎杖水提液的抗病毒作用。结果显示：虎杖水提液可以部分地抑制ＬＰＢＭ５病毒导致的Ｃ５７ＢＬ／６鼠的脾肿大，免疫抑制和病毒血症；病毒接种前和接种同时给药效果较好，接种一星期以后开始的治疗对感染鼠的各项异常指标没有明显的改善作用，提示早期用药效果较好；持续给药可以部分地控制感染鼠脾肿大和脾细胞对刀豆蛋白Ａ的刺激应答降低，但对高球蛋白血症的改善作用是非持续性的。
以化合物对ＨＩＶ１诱导Ｃ８１６６细胞形成合胞体的抑制实验和化合物对ＨＩＶ１感染细胞的保护实验作为初筛方法，筛选了来源于７科１７种植物的４７个样品，其中８个样品经测定是核糖体失活蛋白（ＲＩＰｓ），其余为粗提蛋白。进而测定了初筛有抗ＨＩＶ活性的化合物对共培养、急性和慢性感染的ＨＩＶ１ｐ２４抗原表达水平的影响，用间接荧光染色检测这些化合物对ＨＩＶ抗原阳性细胞率的影响，以确证其抗ＨＩＶ活性。天花粉蛋白（ＴＣＳ）、南方栝楼蛋白峰Ⅴ、南方栝楼蛋白峰Ⅵ均显著地抑制合胞体的形成；巴Ⅱ、丝瓜子蛋白、油瓜根蛋白、木盍藤子蛋白有一定的抑制作用。老鼠拖瓜蛋白、大叶木鳖子根蛋白、西双版纳根Ⅱ等粗提蛋白有显著的抑制作用。ＲＩＰｓ不能保护ＨＩＶ１感染细胞的死亡。ＴＣＳ显著地抑制了ＨＩＶ１急性感染中ｐ２４抗原的表达，减少了ＨＩＶ抗原阳性细胞数，但它们均不影响共培养细胞融合、ＨＩＶ１慢性感染中ｐ２４抗原表达水平。结果表明，除ＴＣＳ等已知ＲＩＰｓ外，还有一些新的ＲＩＰｓ具有不同程度的抗ＨＩＶ活性。
利用基因克隆技术，将ＨＰＶ１６湖北株完整的Ｅ７基因克隆到含乳糖操纵子的表达载体ｐＷＲ５９０１上，经限制性酶切分析获得重组质粒ｐＷＨＢＥ７。ｐＷＨＢＥ７转化大肠杆菌后表达产生分子量为７０ｋＤ的融合蛋白ｌａｃＥ７，该蛋白在免疫印迹实验中可被标准Ｅ７单抗识别。经ＩＰＴＧ诱导后，Ｅ７融合蛋白产量可达细菌总蛋白含量的３０％以上。利用ｌａｃＥ７蛋白在细菌胞浆中形成包含体的性质，简便地提取并纯化了该蛋白质。结果为从免疫学角度探讨ＨＰＶ１６与宫颈癌的关系以及ＨＰＶ疫苗的研制打下基础。
应用核酸原位分子杂交技术研究了国内不同地区３０例流行性出血热患者尸检组织中病毒ＲＮＡ及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ细胞内定位，同时观察了汉坦病毒感染的ＶｅｒｏＥ６细胞中ＨＳＰ７０的表达情况。结果表明，热休克蛋白７０ｍＲＮＡ在多数组织中均可检测到，分布与病毒ＲＮＡ一致，并且与组织的病理损害有关；体外实验的结果也表明在出血热病毒感染的细胞中有ＨＳＰ７０的高表达。提示热休克蛋白与汉坦病毒的致病以及流行性出血热的发病机理有关。
用ＰＣＲ法获得了ＨＢｓＡｇｐｒｅＳ１（１－６５）肽段基因，将该基因融合在肿瘤坏死因子（ｈＴＮＦα）之后，插入表达载体ＰＳＢ－９２中，使融合基因的５′端直接置于大肠肝菌ＰＬ启动子下游，采用３０℃培养，４２℃诱导，获得了ＴＮＦ与ｐｒｅＳ１（１－６５）融合蛋白的表达产物。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳显示表达产物为２５ｋＤ，约占细菌总蛋白的３５％。表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ验证，能分别特异地与ｈＴＮＦα抗体与ｐｒｅＳ１抗体结合，稀释复性后，该融合蛋白还具有ＴＮＦ的生理功能（对Ｌ９２９细胞的细胞毒活性）。经ＤＮＡ序列测定，ｐｒｅＳ１（１－６５）肽基因正确地融合在ｈＴＮＦα基因之后。该结果提供了一种制备ｐｒｅＳ１的新方法，为进一步开展治疗肝癌和乙肝的导向药物打下基础。
为了获得高效表达的人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ１）ｇｐ４１蛋白，从而为ＨＩＶ１基因工程诊断抗原的国产化打下基础，用ＰＣＲ的方法从ＨＩＶ１全基因序列中扩增出编码ｇｐ４１Ｎ端的６９０ｂｐ片段。经酶切后，克隆到ｐＥＴ２８ａ载体中，再将重组质粒转化到表达宿主菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中，经ＩＰＴＧ诱导，高效表达出ｇｐ４１蛋白。间接ＥＬＩＳＡ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、ＳＤＳＰＡＧＥ电泳证实，该表达产物具有良好的抗原性和特异性，且表达量约占总菌体蛋白的４５％。重组蛋白经金属鏊合纯化，纯度达９９％。
对防治蔬菜甜菜夜蛾（ＳｐｏｄｏｐｔｅｒａｅｘｉｇｕａＨüｂｎｅｒ）和斜纹夜蛾（ＰｒｏｄｅｎｉａｌｉｔｕｒａＦａｂｒｉｃｉｕｓ）为主并兼治菜螟、菜青虫、小菜蛾等鳞翅目害虫的单一型和复配型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ，ＡｃＭＮＰＶ）生物杀虫剂进行筛选。毒力测定结果表明：选用单剂的ＡｃＭＮＰＶＡ株（从甜菜夜蛾虫体增殖获得）的毒力（ＬＤ５０＝１３１．８ＰＩＢ／头）比ＡｃＭＮＰＶＢ株（从草地贪夜蛾细胞株Ｓｆ９中获得）的毒力（ＬＤ５０＝１９４９．４ＰＩＢ／头）高１４．７９倍。ＡｃＭＮＰＶＡ株加苏云金杆菌（Ｂｔ）加斜纹夜蛾核型多角体病毒（ＰｌＮＰＶ）形成的复配型ＡｃＭＮＰＶＡ株制剂对甜菜夜蛾二龄幼虫的ＬＤ５０值（２１．８２～２１．４ＰＩＢ／头）与单剂ＡｃＭＮＰＶＡ株的ＬＤ５０值（１６８．８４～２０４．３６ＰＩＢ／头）比值为９．５～７．７倍。同样复配型ＡｃＭＮＰＶＡ株制剂对斜纹夜蛾二龄幼虫ＬＤ５０（３．１６～１５．４６ＰＩＢ／头）与单剂ＰｌＮＰＶＬＤ５０值（１６．０２～５３．５３ＰＩＢ／头）比值为５．１～３．５倍。说明以Ｂｔ和非耙标害虫病毒作为增效剂的复配型ＡｃＭＮＰＶＡ株制剂对两种夜蛾害虫有明显增效作用。以复配型ＡｃＭＮＰＶＡ株制剂形成的蔬菜复合病毒杀虫剂（ＳＮＢ３）防治蔬菜重要鳞翅目五种抗性害虫取得良好效果。
从随机噬菌体九肽表位库中筛选出抑制草鱼出血病病毒（ＧｒａｓＣａｒｐＨｅｍｏｒｈａｇｅＶｉｒｕｓ，ＧＣＨＶ８７３）感染的多肽分子。采用完整、生物素化的草鱼出血病病毒颗粒作为受体，与以融合蛋白形式在丝状噬菌体ｆＵＳＥ５的外壳蛋白Ⅲ的Ｎ端表达的随机九肽库作用。经三轮体外亲和筛选（Ｂｉｏｐａｎｎｉｎｇ）及ＥＬＩＳＡ法检测后，从肽库中筛选出１６个与病毒高亲和力结合的噬菌体克隆，其中六个阳性克隆能有效地抑制病毒在ＣＩＫ细胞中的复制，并使病毒的半数组织培养感染剂量（ＴＣＩＤ５０）下降五个数量级。表明噬菌体肽库技术完全能够应用于抗病毒研究，为研制抗病毒短肽制剂打基础。
将草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ８７３）颗粒与随机噬菌体九肽库在体外作用，三轮筛选后，从３００个转化的单菌落中获得１６个与病毒高亲和力的噬菌体克隆。接着经过抗病毒试验获得６个能强烈抑制病毒复制的阳性噬菌体克隆，能使病毒ＴＣＩＤ５０下降５个数量级。通过对阳性噬菌体克隆随机插入区域的核苷酸序列分析，推导出多肽的氨基酸序列。发现６个能强烈抑制病毒复制的阳性克隆中多肽的氨基酸序列完全一致（ＮＨ２ＬｅｕＴｒｐＶａｌＧｌｙＧｌｙＧｌｙＡｒｇＡｓｎＡｌａ），该结果提示多肽的抗病毒能力与多肽特异性氨基酸组成及结构有关。因此，抑制ＧＣＨＶ８７３复制特异性多肽的氨基酸序列的确定及结构分析，不仅为人工合成抗草鱼出血病病毒的多肽奠定了基础，同时也为抗病毒多肽制剂的研制提供了依据。
痘苗病毒感染ＨｅＬａ细胞后形态学上出现了较典型的细胞凋亡特征，电泳分析显示出ＤＮＡ阶梯，用ＤＮＡ断裂原位检测技术发现其染色质断裂主要存在于核周，与染色质凝聚位置相似。
为了解连云港海域贝类甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）污染状况，证实其在本地区甲肝传播中的媒介地位，我们应用抗体捕捉聚合酶链反应（ＡＣ／ＰＣＲ）检测市售贝类的ＨＡＶ，结果报告如下：材料和方法１贝类样品于１９９６年春、秋二季采集新浦区、连云区和赣榆县等地水产品市场...
39卷第1期 (2024年2月)
ISSN 1674-0769
EISSN 1995-820X
CN 42-1760/Q
主编: 石正丽
影响因子: 5.5*
*源于2022年JCR
GALLERY
会议信息更多+
新闻更多+
- [01/11]《中国病毒学（英文）》期刊编辑部招聘启事
- [05/07]Q1区！VS最新影响因子5.5！
- [22/02]2022年VS高被引论文奖发布
- [21/10]第十届新生病毒性疾病控制学术研讨会 | 第一轮通知
- [09/09]肝癌细胞中CK1α上调IFNAR1的表达，从而促进I型IFN抑制HBV复制
- [09/09]一种新的干扰素诱导的长非编码RNA ZAP-IT1阻断寨卡病毒在A549细胞中的复制
- [09/09]首发精神分裂症中，驯化的人内源性逆转录病毒W家族包膜蛋白通过降低5-HT4受体的水平激活SK2
- [09/09]发热伴血小板减少综合征病毒L蛋白功能域和保守残基研究为理解病毒RNA转录/复制机制提供新思路
- [09/09]亲环素A结合AKT1并通过介导AKT/mTOR/NF-κB正反馈环路的激活促进EB病毒的致瘤作用 | VS推荐
- [09/09]转录组分析显示克里米亚刚果出血热病毒调控的关键细胞过程及III型干扰素的抗病毒作用 | VS推荐
