1999年14卷1期
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人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)是引起艾滋病的病原。由于该病的病死率较高，目前尚没有被广泛接受的有效的医治方法，所以世界各国对艾滋病都十分重视。在感染HIV时，HIV首先与靶细胞上的(receptor)结合后，才能进入该细胞并在其内繁殖。所以充分地了解HIV 的受体及辅助受体(eoreceptor)，对控制HIV 的感染和传播是至关重要的。
用Veto E6细胞从12倒水痘及带状疱疹病^水疱液中分离到l0株病毒，分离阳性率为83 3％。10株病毒均具有使感染细胞圆缩、融合、脱落等典型的vzv 局灶性细胞病变(CPE)特点，CPE随着传代次数增加而加快 用带状疤疹恢复期病^血清作闻接免疫荧光染色镜检，可见典型的感染细胞核内荧光块。1O株病毒感染细胞制成的抗原片．检测5倒带状疱疹病^急性期及恢复期血清。荧光抗体滴度均有4倍以上增高。Vzv对Vero细胞敏感；对沙鼠肾，胎兔肾．胎豚鼠肾、肺、脾原代单层细胞不敏感；对乳小白鼠不敏感。毒种在一20℃保存一周内死亡；但在30％脱脂牛奶、20％小牛血清及10％ 山梨醇Eagles液中，蔽体或真空冷冻干燥一100℃可保存二年以上。
采用ＨＧＶＮＳ５特异的２对引物，对两个香港株和一个广东株ＨＧＶＲＮＡ进行逆转录套式ＰＣＲ扩增，ＰＣＲ产物克隆入ｐＵＣ１９，重组质粒转化ＤＨ５和ＪＭ１０９菌株。ＰＣＲ和酶切法鉴定阳性克隆，双脱氧链末端终止法测定核苷酸序列并进行同源性分析。结果发现核苷酸变异呈散在分布，三株间核苷酸和氨基酸序列同源性分别为９３．３％～９４％及９７％～９９．２％，与已报道的中国株（ＣＮ）相比，则同源性分别为９０％～９１．２％和９４％～９６．３％，与美国株（ＰＮＦ２１６１及Ｒ１０２９１）相比，为８７．１％～８９．５％和９５．２％～９７％，而与西非株（ＧＢＶＣ）相比，则达９１．４％～９３．８％和９７％～９７．９％。提示ＨＧＶＮＳ５区核苷酸和氨基酸序列相对保守，不同ＨＧＶ株存在一定的地区差异。
采用ＰＣＲ定点突变方法，成功地构建了抗ＨＢｓＡｇｄｓＦｖ抗体的轻、重链突变基因，ＮｄｅＩ和ＥｃｏＲＩ酶切后分别插入ｐＥＴ２０ｂ表达质粒，经测序证明在重链第４４位氨基酸和轻链第１００位氨基酸已突变形成半胱氨酸（Ｃｙｓ）。ＶＨ和ＶＬ重组质粒分别转化到大肠肝菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中，ＩＰＴＧ诱导后，经ＳＤＳＰＡＧＥ电泳表明在１２ｋＤ处有包含体蛋白表达，表达蛋白含量分别为２８％和３５％。ＶＨ和ＶＬ包含体蛋白经ＧｕＨＣｌ变性后，等量混合在复性折叠液中结合，形成了一个约２４ｋＤ并有一定活性的ｄｓＦｖ蛋白。抗ＨＢｓＡｇｄｓＦｖ抗体表达及复性的成功，为今后基因工程抗体的研究及应用奠定了基础。
从汉坦病毒陈株感染的ＶｅｒｏＥ６细胞裂解液中提取病毒ＲＮＡ，经逆转录ＰＣＲ获得病毒Ｓ基因编码区约１．３ｋｂｃＤＮＡ片段，克隆该片段后进行核苷酸序列测定，并与汉坦病毒７６１１８株进行同源性比较，结果二者核苷酸序列同源性为８６％，推导的氨基酸序列同源性为９７％。将该基因片段插入原核表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ１，在大肠杆菌中获得高效表达。表达产物为ＧＳＴＮＰ融合蛋白。ＳＤＳＰＡＧＥ检测表达蛋白分子约７２ｋＤ左右。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ和ＥＬＩＳＡ试验结果表明，表达产物可与多株抗汉坦病毒核蛋白的ＭｃＡｂ发生反应，其抗原表位及ＭｃＡｂ反应谱与７６１１８株相比存在某些差异。
采用ＰＣＲ扩增、噬菌体克隆和核苷酸序列分析的方法对一例乙型肝炎患者体内ＨＢＶ的ＨＢｓＡｇ编码区和部分前Ｓ２区进行序列分析。结果发现同一患者体内获得的不同ＨＢＶＤＮＡ克隆间存在个别碱基的差异，而这种差异并非方法学本身产生的。由此得出的结论是，这种碱基突变反映了乙型肝炎患者体内ＨＢＶ基因组实际存在的多态性。
以ＡｃＮＰＶ凋亡抑制基因ｐ３５为探针，与ＬｓＮＰＶＤＮＡ的限制性片段和ＬｓＮＰＶＤＮＡＥｃｏＲＶ片段杂交，发现ＥｃｏＲＶ５．５ｋｂ片段有强烈的杂交信号。将此片段亚克隆后，测定了１２４４ｂｐ序列，发现一个完整的ＯＲＦ，推导的３０２个氨基酸与ＡｃＮＰＶｐ３５蛋白有７０．４％的氨基酸同源性，证明所测ＯＲＦ为ＬｓＮＰＶ的ｐ３５基因。结构分析发现其５端有早期基因启动子元件ＧＣ、ＡＣＧＴ和ＴＡＴＡｂｏｘ。有２２ｂｐ的顺向重复序列，包括由两个重叠的ＴＡＴＡｂｏｘ和上下游两个ＡＣＧＴｍｏｔｉｆ组成的两套启动子元件，这些结构特征与ＡｃＮＰＶ的凋亡抑制基因十分相似。
将本室合成、克隆的马铃薯卷叶病毒（ＰｏｔａｔｏＬｅａｆｒｏｌＶｉｒｕｓ，ＰＬＲＶ）中国分离株的基因间隔区（ｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃｓｅｑｕｅｎｃｅ，ＩＳ）双链ｃＤＮＡ以正、反向两种方式分别构建于转化载体ｐＲＯＫ２中，通过致瘤农杆菌介导，以马铃薯叶圆片为转化材料，转化马铃薯栽培品种Ｄｅｓｉｒｅ，获得了转基因植株。卡那霉素抗性分析和ＰＣＲ检测目的基因，证明ＰＬＲＶＩＳ双链ｃＤＮＡ已经整合到转基因马铃薯的染色体基因组中。将转基因植株移栽网棚用蚜虫接种ＰＬＲＶ，观察症状并用酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）检测转基因植株中ＰＬＲＶ含量。结果表明，表达ＰＬＲＶＩＳ正意和反意ＲＮＡ的转基因植株，接种病毒后表现无症状或症状轻微，ＰＬＲＶ平均滴度均较未转基因对照植株低。表达正意ＲＮＡ的转基因植株ＰＬＲＶ滴度降低４３％～７２％，表达反意ＲＮＡ的转基因植株ＰＬＲＶ滴度降低７２％～８６％，由此可见，表达ＰＬＲＶＩＳ反意ＲＮＡ的转基因马铃薯对ＰＬＲＶ抗性较强。
从紫果西番莲（Ｐａｓｉｆｌｏｒａｅｄｕｌｉｓ）、杂交种西番莲（Ｐ．ｅｄｕｌｉｓＸＰ．ｅｄｕｌｉｓｖａｒ．ｆｌａｖｉｃａｒｐａ）、黄果西番莲（Ｐ．ｅｄｕｌｉｓｖａｒ．ｆｌａｖｉｃａｒｐａ）、转心莲（Ｐ．ｃａｅｒｕｌｅａ）及龙珠果（Ｐ．ｆｏｅｔｉｄａ）分离到的５个黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）分离物（ＰＥ、ＰＥ２、ＰＥｆ、ＰＣ、ＰＦ）所作的生物学性质、理化特性和血清学关系的比较研究结果表明，５个分离物在寄主反应及血清学性质上存在不同，而在病毒粒体形态、体外抗性、蚜虫传毒和病毒外壳蛋白分子量方面无明显差异。根据５个分离物的寄主反应和血清学关系，可将其区分为ＣＭＶ的两个亚组，其中ＰＥ、ＰＥ２、ＰＣ和ＰＦ属ＣＭＶ亚组Ｉ，ＰＥｆ属ＣＭＶ亚组Ｉ。
根据已发表的序列，分别在鸡贫血病毒（ＣＡＶ）环形基因组ＤＮＡ（全长２．３ｋｂ）的ＥｃｏＲＩ位点和ＢａｍＨＩ位点的两侧选择适当序列合成两对引物，用ＰＣＲ技术，从斑点杂交检测到病毒核酸的ＣＡＶ感染的ＭＤＣＣＲＰ１细胞基因组ＤＮＡ中，分别扩增出包含ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ分割开的病毒基因组两部分（１．５ｋｂ和０．８ｋｂ）约１．５ｋｂ和约１．２５ｋｂ的两个片段。再将其中相应序列拼接克隆进ｐＵＣ１８载体，获得包含ＣＡＶ全基因组序列ＤＮＡ片段的克隆质粒ｐＣＡＶ２．４。酶切分析表明，该质粒具有预期的ＢａｍＨＩ位点、ＰｓｔＩ位点、ＨｉｎｄⅢ位点，而预期的ＥｃｏＲＩ位点消失。重组质粒插入ＤＮＡ片段的两端序列分析表明，质粒ｐＣＡＶ２．４是包含ＣＡＶ全基因组序列的重组质粒，插入ＤＮＡ片段序列中的ＥｃｏＲＩ位点序列发生了一个碱基突变。
采用差速离心的方法纯化感染草鱼出血病病毒的细胞悬液。提纯的病毒粒子经蛋白酶Ｋ处理和酚氯仿抽提，在１％琼脂糖凝胶电泳条件下分离得到１１条ｄｓＲＮＡ，利用柱离心式胶回收试剂盒纯化各基因片段。纯化的ｄｓＲＮＡ溶于９０％的ＤＭＳＯ中，７０℃变性１５ｍｉｎ，然后采用随机引物法反转录合成各基因片段的ｃＤＮＡ，并平头连接于ｐＺＥｒＯ２．０载体的ＥｃｏＲＶ位点，电转化ＴＯＰ１０感受态细胞。重组质粒经酶切、ＰＣＲ扩增得到大小不等的插入片段，ｃＤＮＡＲＮＡ斑点杂交的结果进一步证实其插入为目的基因片段。采用循环ＰＣＲ测序的方法，对其插入片段进行了序列测定，对其中第１１片段的部分序列作了报道。
为了解ＨＩＶ抗体阳性血浆中的ＨＩＶ１病毒基因亚型的情况，应用逆转录ＰＣＲ和ＤＮＡ序列测定技术，对６份获自高危人群的抗ＨＩＶ１阳性血浆进行序列分析和基因亚型分型的研究，结果表明均属ＨＩＶ１Ｂ亚型。Ｖ３环氨基酸序列分析指出这些ＨＩＶ１Ｂ亚型病毒株与泰国ＨＩＶ１Ｂ亚型病毒株核苷酸和氨基酸序列相似；同时发现ＨＩＶ１ｃＤＮＡ和氨基酸序列均相同，推测这６份标本可能来自同时感染同一株ＨＩＶ病毒的感染者。本研究对了解高危人群中ＨＩＶ１流行的遗传变异和ＨＩＶ１亚型病毒株的分子流行病分析具有一定的意义。
将肾综合症出血热病毒布于玻璃平皿表面，室温条件下分别暴露０、３０、６０、９０和１２０ｍｉｎ，观察病毒的定量存活情况。结果在经过１２０ｍｉｎ的暴露后，ＨＦＲＳＶ的效价仍高达１０４．２３ＴＣＩＤ５０。这一结果为ＨＦＲＳ的流行病学及其防治研究提供了重要的基础数据。
为进一步研究ＨＦＲＳ免疫损伤机制，用ＥＬＩＳＡ法同步测定了１０８例不同临床型、不同病日、病期ＨＦＲＳ患者血清中特异性ＩｇＡ、ＩｇＥ抗体以及ＨＦＲＳ病毒特异性ＩｇＡ、ＩｇＥ型ＣＩＣ的水平及检出率。发现ＨＦＲＳＩｇＡ型抗体在轻型病例高于中、重型病例；ＨＦＲＳＩｇＥ型抗体及ＩｇＥ型ＣＩＣ在重型病例高于中、轻型病例。上述差异在病程早期（发热、休克少尿期，或是３～８病日）尤为突出。ＩｇＡ型ＣＩＣ则未见到上述差异。
在云南省西南边境９县市捕获伊蚊属雌性成蚊１６种１９３６７只，用细胞法和乳鼠法分离病毒。从１８５批６４９１只白纹伊蚊中分离到病毒２株，从５０批１６０５只剌扰伊蚊中分离到病毒２株，从２３批７７２只窄翅伊蚊中分离到病毒２株，从４批１０３只阿萨姆伊蚊中分离到病毒１株。其它１２种共１０３９６只伊蚊的病毒分离物为阴性。分离到的７株病毒经免疫荧光、酶免疫、血凝抑制和中和试验鉴定，均为乙型脑炎病毒（ＪＥｖｉｒｕｓ）。白纹伊蚊是野外竹林的优势蚊种。分析认为白纹伊蚊在当地乙型脑炎病毒保存和传播中起重要作用，刺扰伊蚊、窄翅伊蚊和阿萨姆伊蚊亦可参与该病毒的传播。
39卷第6期 (2024年0月)
ISSN 1674-0769
EISSN 1995-820X
CN 42-1760/Q
主编: 肖庚富
影响因子: 4.3*
*源于2023年JCR
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