Virologica Sinica

1998年13卷2期

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Review

用于基因治疗的病毒载体

刘子夜, 齐义鹏, 王业富

1998, 13(2): 101

[摘要] [PDF 211 KB]

近几年来，基因治疗研究发展迅速，目的是将外源基因导入靶细胞，在体内产生疗效。早在１９９０年美国ＮＩＨ的研究人员就将腺苷脱氢酶（ａｄｅｎｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ，ＡＤＡ）基因导入病人的淋巴细胞，改善了由于ＡＤＡ基因缺损造成的免疫缺陷.

RNA病毒RNA聚合酶的研究进展

丁清泉

1998, 13(2): 107

[摘要] [PDF 256 KB]

自然界仅有ＲＮＡ病毒以ＲＮＡ作为基因载体。依赖于ＲＮＡ的ＲＮＡ聚合酶在这种病毒的增殖复制期起到了非常重要的作用。它一方面以病毒ＲＮＡ为模板复制子代病毒的基因，另一方面也将病毒增殖期间需要的蛋白质和酶类的基因转录成为ｍＲＮＡ，也就是说它担负了复制酶和转...

真菌传棒状病毒的分类及其特性

陈剑平, 陈炯, 程晔

1998, 13(2): 114

[摘要] [PDF 254 KB]

大约有１１种棒状病毒，由根瘤菌纲土栖真菌（ＰｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａｃｅｏｕｓＳｏｉｌＩｎｈａｂｉｔｉｎｇＦｕｎｇｉ）传播（详见表１）。

乙型肝炎病毒adr亚型X蛋白在大肠杆菌中的高效表达

房德兴, 周宗安, 翟春生, 顾志香, 王元伦, 何亮

1998, 13(2): 122

[摘要] [PDF 175 KB]

将ａｄｒ亚型ＨＢＶ的完整Ｘ基因克隆到表达质粒ｐＰｒｏＥＸＨＴｂ中，实现了Ｘ蛋白在大肠杆菌中的高效融合表达。表达产物全长１７９个氨基酸残基（其中Ｘ蛋白部分１５４个氨基酸残基），分子量约１９．７ｋＤ，约占细菌总蛋白的３４％。其氨基端融合部分含有６组氨酸肽段，经ＨｉｓＴｒａｐＴＭ亲和层析纯化，一步可达纯度９３％。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析表明，该表达产物可与ＨＢＶ感染患者体内的抗Ｘ抗体特异性结合。

丙型肝炎病毒免疫电镜的初步研究

王理富, 李德富, 郎淑慧, 尹红章, 冯建平

1998, 13(2): 132

[摘要] [PDF 214 KB]

采用组织匀浆免疫沉淀后负染、免疫组化块染后包埋、原位包埋等免疫电镜技术，研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）。组织匀浆、免疫沉定、负染后在电镜下观察到与ＨＣＶ相关的类病毒颗粒，形态与披膜病毒相似，大小多在５５～６５ｎｍ，圆形，有包膜，边缘略有突起或比较平滑，有胶体金结合在此种颗粒上及其周围。无关单抗阴性对照无类似颗粒及胶体金。免疫酶染电镜下还见到成堆可疑颗粒。此外，ＨＣＶ－Ｅ区抗原染色后原位包埋，尚发现胶体金大多结合于大小５０ｎｍ左右圆形结构的内部，表明Ｅ区单抗针对的特异性抗原位点位于这种结构的内侧。

人白细胞介素-18基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

徐东刚, 牛建章, 孟宗达, 逯好英, 陈淑芬, 崔泽, 朱会宾, 孟文华

1998, 13(2): 138

[摘要] [PDF 114 KB]

利用反转录ＰＣＲ（ＲＴＰＣＲ）法从人肝组织中分离人白介素１８（ｈＩＬ１８）基因。克隆到Ｔｖｅｃｔｏｒｅａｓｙ载体中，经酶切初步鉴定后进行ＤＮＡ序列分析，结果表明与文献报道完全一致。以ｐＢＶ２２０为表达载体，在大肠杆菌中高效表达了ｈＩＬ１８基因，重组蛋白占菌体总蛋白的２７．２％。为进一步研究其生物活性奠定了重要基础。

中国棉铃虫核型多角体病毒几丁质酶基因的定位与克隆

彭辉银, 李星, 张双民, Basil M. Arif, 陈新文, 胡志红

1998, 13(2): 139

[摘要] [PDF 158 KB]

以α３２ＰｄＡＴＰ标记含ＣｆＭＮＰＶ几丁质酶基因的重组质粒为探针，在６８℃条件下对棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，将ＨａＳＮＰＶ的几丁质酶基因分别定位在ＢａｍＨＩＥ、ＢｇｌⅡＥ、ＥｃｏＲＩＧ、ＨｉｎｄⅢＦ、ＸｂａＩＨ、ＢａｍＨＩ＋ＨｉｎｄＩＩＭ和ＢａｍＨＩ＋ＸｂａＩＨ，并以ｐＴＺ１９Ｒ为载体获得了ＸｂａＩＨ片段克隆。

棉铃虫核型多角体病毒Hind III-K片段的核苷酸序列及其分析

张传溪, 孙建新, 姜育蕾, 胡萃, 吴祥甫

1998, 13(2): 149

[摘要] [PDF 197 KB]

测定了棉铃虫（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａａｒｍｉｇｅｒａ）核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）基因组ＤＮＡ的ＨｉｎｄＩＩＫ片段核苷酸序列。该片段全长３２５５ｂｐ，含可编码大于４０个氨基酸残基的多肽的开放阅读框（ＯＲＦ）１５个，包括多角体蛋白（ｐｈ）基因编码区３′端４８９ｂｐ和蛋白激酶ＨａｖＰＫ基因编码区８０１ｂｐ。在ｐｈ和ＨａｖＰＫ两基因之间鉴定出一个可编码４１２个氨基酸残基的ＯＲＦ１２３６，转录方向与ｐｈ和ＨａｖＰＫ基因相反。同源分析表明，ＯＲＦ１２３６与谷实夜蛾（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａｚｅａ）核型多角体病毒（ＨｚＳＮＰＶ）的ＯＲＦ８推导的蛋白氨基酸序列有９５．９％同源性，与苜蓿丫纹夜蛾（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）核型多角体病毒（ＡｃＭＮＰＶ）ＯＲＦ１６２９只有２４．８％同源性，但三者均含有二组由多个脯氨酸残基串联而成的特征基序。

番茄花叶病毒外壳蛋白基因及3′端非编码区的克隆、序列分析及其表达

薛朝阳, 周雪平, 刘勇, 李德葆

1998, 13(2): 150

[摘要] [PDF 175 KB]

根据已报道的番茄花叶病毒Ｌ株系（ＴｏＭＶＬ）序列人工合成引物，经ＲＴＰＣＲ扩增并克隆了我国番茄花叶病毒分离物（ＴｏＭＶＳ１）的外壳蛋白ＣＰ基因及３′端非编码区。序列测定结果表明，所得ｃＤＮＡ共长６８２个核苷酸，其中ＣＰ基因含４８０个核苷酸，编码１５８个氨基酸，３′端非编码区含２０２个核苷酸，其核苷酸序列与ＴｏＭＶＬ株系具有９９．５％的同源率。将该基因片段克隆到ｐＧＥＭＥＸ１载体中，转入Ｅ．ｃｏｌｉ后诱导表达，经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测证明，该基因已在大肠杆菌中正确表达。这是我国首次报道ＴｏＭＶＣＰ基因序列。

生物素标记寡核苷酸探针检测B群轮状病毒

刘明军, 王正党, 王升启

1998, 13(2): 159

[摘要] [PDF 123 KB]

用５′端接氨基标记法，用生物素对Ｂ群轮状病毒（ＧＢＲＶ）ＩＤＩＲ株具有群特异性的３片段基因上２３ｂｐ寡核苷酸序列进行标记，经高效薄层层析板（ＨＰＴＬＣ）纯化，制备了Ｂ群轮状病毒生物素寡核苷酸探针，探针显色灵敏度达１０Ｐｇ，与ＧＢＲＶ、ＫＢ６３株基因杂交可检测到１００ｐｇ靶序列，而与Ａ群和Ｃ群轮状病毒及无关基因均不产生杂交信号，该探针可用于Ｂ群轮状病毒的检测、鉴定，以及同群不同毒株间基因相关性研究。

减蛋综合征病毒100K蛋白基因的克隆与序列分析

李茂祥, 金奇, 章金钢, 曾力宇, 姚二梅, 殷震, 侯云德

1998, 13(2): 160

[摘要] [PDF 194 KB]

用常规方法提取减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）中国分离株（ＡＡ２株）病毒ＤＮＡ，分别构建了限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ、ＳｐｈⅠ、ＰｓｔⅠ水解片段的全基因文库，并对其中１００Ｋ蛋白基因的序列进行了分析。ＥＤＳＶ１００Ｋ蛋白基因位于减蛋综合征病毒基因组５５．７～６４．８物理图谱单位（ｍ．ｕ），共２０９１个核苷酸（ｎｔ），其编码产物由６９６个氨基酸（ａａ）组成，推测其分子量为７７．７ｋＤ。编码蛋白氨基酸同源性分析表明，ＥＤＳＶ１００Ｋ蛋白与人腺病毒（Ａｄ２、Ａｄ５、Ａｄ１２、Ａｄ４１）、Ⅰ群禽腺病毒（ＣＥＬＯ和ＦＡＶ１０）的同源性为３２．３～３４．４％之间，而与羊腺病毒（ＯＡＶ）的同源性达到５６．４％。