1998年13卷1期
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丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）是单股正链ＲＮＡ病毒，有单一阅读框架，编码约３０１０个氨基酸的病毒前体蛋白。ＨＣＶ基因组结构和病毒蛋白的亲疏水性与黄病毒相似，因此将其归于黄病毒科丙型肝炎病毒群。
双生病毒（Ｇｅｍｉｎｉｖｉｒｕｓ）是一组具有双生颗粒形态的单链环状ＤＮＡ植物病毒［１～３］。典型的双生病毒为1８×３０ｎｍ颗粒，基因组大小为２．５～３．０ｋｎｔ。双生病毒研究已成为植物病毒学最活跃的领域之一.
人巨细胞病毒(HCMV)是一种重要的病毒，属于疱疹病毒科，在普通人群中的感染率为
80％以上，对于某些特殊地区和人群，其感染率可高达100％。人群感染HCMV后，通常呈隐
性感染，但对于孕妇和免疫能力低下者(如器官移植病人、艾滋病患者)，该病毒易导致严重的
病症，并且可能与肿瘤的诱发有密切关系? 。HCMV基因组为双链DNA，全长超过240 kbp，
至少包括208个开放阅读框架(()RF) 与疱疹病毒科的其它病毒一样，HCMV基因的表达呈
现出一定的时序性，即表达可分为立即早期(IE)、早期和晚期。其中，IE基因的表达被宿主因
子所激活[2一，不需要病毒蛋白质的合成，并在病毒其它基因以及宿主细胞的某些基因的表达
和调控方面有着重要的作用。主要IE因子(MIE)是IE基因中的主要组成部分，由该启动子
(MIEP)转录出的RNA经过不同方式的拼接，产生长度分别为1．95 kb、2．25 kb和1 70 kb的
三种mRNA，分别编码分子量为72kDa(IEl72)、86 kDa(IE286)、55 kDa(IE255)的三种蛋白.
根据流行于我国的两型ＨＦＲＳＶ代表株汉滩型７６１１８株及汉城型Ｒ２２株Ｍ节段的核酸序列，设计两型共同引物，建立了逆转录－聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）方法，检测３９株从不同地区、不同宿主分离的ＨＦＲＳＶ感染鼠脑及细胞培养物；同时还建立了捕捉ＥＬＩＳＡ法（ｃＥＬＩＳＡ），检测了３９株中的３６株，每份样本设复孔，以Ｐ／Ｎ≥２．１０且Ｐ－Ｎ≥０．１０者判为阳性。ＲＴＰＣＲ及ｃＥＬＩＳＡ两法的检出率分别为９７．６％与８２．４％，二者符合率８４．６％。此外，对ＲＴＰＣＲ产物进行酶切分型，３８份扩增产物中的１５份可被ＡｌｕＩ切开。根据所获酶切图谱的差异，可分为汉滩型及汉城型两型，显示了酶切分型的潜在价值
用Ｂ９５８细胞株产生的ＥＢ病毒，转化棉顶狨猴外周血淋巴细胞，获得ＫＭＴ３细胞株。该细胞株能产生高滴度的ＥＢ病毒。含ＥＢ病毒衣壳抗原的自然阳性细胞率为３～５％，激活后达５０～６０％，其培养上清液可直接转化人淋巴细胞得到传代细胞系。ＫＭＴ３细胞染色体数２ｎ＝４６条
对２３例国内献血员、血透析及肝炎病人血清用反转录巢式ＰＣＲ技术扩增了ＨＣＶＲＮＡ囊膜蛋白２基因的ｃＤＮＡ片段，并进行了序列测定。结果表明２３例病人ＨＣＶＥ２／ＮＳ１Ｎ末端的核苷酸及氨基酸序列呈现多样性，高变区１（ＨＶＲ１）位于核苷酸第１４５９～１５５９位，氨基酸第３８４～４１０位；我国ＨＣＶ株ＨＶＲ１２７个氨基酸中有１５个位置氨基酸相对稳定，氨基酸组成与分布均与Ｓｅｋｉｙａ报道的１６６个ＨＣＶ株的不同。结果提示，研究我国ＨＣＶ株ＨＶＲ１的序列特征有助于ＨＣＶ的流行病学研究，对研制适用于我国的抗体诊断试剂盒及进行疫苗研究均有重要的意义。
为探讨肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）在恙螨体内的分布和定位，采用原位分子杂交技术检测恙螨体内ＨＦＲＳＶＲＮＡ。结果发现：原位分子杂交技术的检出阳性率较ＩＦＡＴ高；ＨＦＲＳＶ阳性信号颗粒呈弥散分布，多见于恙螨幼虫和若虫的腹部组织细胞内，该部位是恙螨的卵巢细胞、中肠及支囊上皮细胞。前体组织细胞内少见；个别幼虫和若虫的前足和中足细胞内亦可见到ＨＦＲＳＶＲＮＡ阳性信号。在原位分子杂交中，若虫组织细胞内的ＨＦＲＳＶＲＮＡ阳性信号较幼虫密集而且量多，表明ＨＦＲＳＶ在恙螨体内可传递并有增殖现象
以ＨｅｐＧ２．２．２．１５细胞株为模型，以其分泌的ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ及细胞存活率为观察指标，综合评价天然多肽类抗生素恩拉霉素体外抗ＨＢＶ效果。结果表明恩拉霉素对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的５０％抑制浓度ＩＣ５０分别为２７μｇ／ｍＬ和３４μｇ／ｍＬ，治疗指数（ＴＩ）分别为５．９和４．６。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ结果显示，５０μｇ／ｍＬ恩拉霉素对细胞内游离ＨＢＶＤＮＡ抑制率为５６．８％。
对同一地区两例输血后丙型肝炎进行ＰＣＲ分型，结果为Ⅱ型。分别将其ＮＳ５区基因部分片段克隆到ｐＵＣ１８和Ｍ１３ｍｐ１８中，序列分析结果表明在ＮＳ５区基因相同区段，二者的核苷酸同源性为８９．０４％，氨基酸同源性为９０．７５％。而且在分离株Ｖ中第７０～７２位发现阅读框内终止密码子ＴＧＡ。与Ⅱ型代表株ＨＣＶＢＫ序列相比，相同区段的核苷酸和氨基酸同源性分别为：９１．５％，９１．９２％和９１．９１％，９１．９１％。对比分析表明，在同一地区基因型相同的不同分离株间ＮＳ５区基因仍存在较大变异，分离株Ｖ可能为缺陷性病毒
本文报导在ＲＨＶＲＮＡ２载体系统中表达的轮状病毒（ＲＶ）Ｖｐ４胰酶切割位点区抗原表位可诱导动物产生具有广泛交叉中和反应的血清抗体。携带有抗原表位ＲＥＡ、ＲＥＢ和ＲＥＣ，及其组合ＲＥＡ＋ＲＥＢ＋ＲＥＣ基因的ｐＥＴ重组质粒，高水平表达了这些与载体蛋白嵌合的抗原表位。进一步研究结果表明，这些抗原表位所诱导的动物血清抗体，具有广泛识别同源及异源血清型ＲＶ抗原的能力，和体外中和这些同源及异源血清型ＲＶ病毒感染性的能力。研究结果揭示ＲＶ胰酶切割位点区氨基酸序列具有重要的免疫学功能，它在ＦＨＶＲＮＡ２外源抗原表位载体系统中表达后，可作为新一代ＲＶ抗原表位亚单位疫苗的候选疫苗抗原。
用ＨＥＶＯＲＦ３合成肽及ＯＲＦ２重组抗原研制成新型ＨＥＶＥＩＡ诊断试剂盒。与ＧｅｎｌａｂｓＨＥＶＥＩＡ检测比较，灵敏度和特异性均达１００％（６０／６０）。三批试剂精密性测定均＜１０％。该试剂盒置４℃８个月或３７℃４ｄ保持稳定。检测不同肝炎患者ＨＥＶ抗体，发现急性非甲非乙非丙肝炎中有６３．２％，甲肝有１３．４％，乙肝有８．３％，丙肝有６．６％，正常人群为２．９％。所研制的戊型肝炎诊断试剂盒，灵敏度高，特异性强，精密性好，稳定性合格。适用于戊型肝炎诊断及戊肝病毒感染的流行病学调查
以ＰＣＲ技术扩增含有ＰｒｅＣ信号肽序列及完整的ＨＢｅＡｇ基因的序列（即ＨＢｃＡｇ基因５′端４４７ｂｐ），在５′端加上合适的酶切位点，克隆到家蚕核多角体病毒转移载体ｐＢｍ０３０上，与野生型ＢｍＮＰＶＤＮＡ共转染家蚕ＢｍＮ细胞，空斑纯化后得到多角体基因失活的重组病毒。ＥＬＩＳＡ法测定表明培养液上清中ＨＢｅＡｇ效价达１∶３２０００，细胞内ＨＢｅＡｇ效价为１∶２０００，培养液及细胞内的ＨＢｃＡｇ含量极低（＜１∶１６０）。研究结果表明，ＢｍＮ细胞能正确识别与切割ＨＢｅＡｇ信号肽序列，所表达的ＨＢｅＡｇ效价高，纯度好，明显优于大肠杆菌表达系统
应用谷实夜蛾核型多角体病毒（ＨｚＳＮＰＶ）ＤＮＡ聚合酶基因ＨｉｎｄⅢ／ＰｓｔⅠ３５９６ｂｐ片段作探针，经Ｓｏｕｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交，克隆了中国棉铃虫核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）完整的ＤＮＡ聚合酶基因，大小约为３．４ｋｂ。限制性内切酶分析表明，ＨａＳＮＰＶＤＮＡ聚合酶基因限制性内切酶图谱与ＨｚＳＮＰＶ相似。用双脱氧链终止法测定该基因部分核苷酸序列（８０５ｂｐ），推导出编码区２０６ａ。序列同源性比较显示，ＨａＳＮＰＶＤＮＡ聚合酶与ＨｚＳＮＰＶ之间具有高度的同源性；与ＬｄＭＮＰＶ、ＡｃＭＮＰＶ、ＢｍＳＮＰＶ、ＣｆＭＮＰＶ和ＯｐＭＮＰＶ也具有一定的同源性.
首次利用虫体克隆技术，对野生型中国棉铃虫核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶＷ）的不同基因型进行了分离纯化。以较低浓度的ＨａＳＮＰＶＷ感染三龄初中国棉铃虫幼虫，病毒致死幼虫单虫收集，分别提取相应的病毒核酸，进行限制性内切酶分析，得到了ＨａＳＮＰＶ的七个不同基因型（ＨａＳＮＰＶＧ１至Ｇ７），其ＥｃｏＲＩ酶切图谱均不相同。用ＢａｍＨＩ酶切分析，七个基因型的酶切图谱只在一个片段上有显著区别：Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４ＤＮＡ的ＢａｍＨＩｈ片段大小是３．３０ｋｂ，Ｇ５、Ｇ６的这一片段的大小为３．５ｋｂ，而Ｇ７的这一片段为２．７ｋｂ。结果表明，野生型ＨａＳＮＰＶ至少包含七个不同的基因型。
由禾谷多粘菌（Ｐｏｌｙｍｙｘａｇｒａｍｉｎｉｓ）传播的线状小麦花叶病毒有两种，一种是加拿大首先报道的小麦梭条斑花叶病毒（ＷＳＳＭＶ），另一种是日本报道的小麦黄花叶病毒（ＷＹＭＶ）。这两种病毒粒子形态以及血清学性质非常相似，但核酸序列存在一定差异。经反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）和单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ），明确我国广泛发生的禾谷多粘菌传线状小麦花叶病毒都是小麦黄花叶病毒，但供试的８个分离物ＲＮＡ１和ＲＮＡ２序列存在差异，无一彼此完全相同
流行性腮腺炎是儿童常见呼吸道传染病，并发症多为睾丸炎、无菌脑炎等。个别患者甚至因严重的脑炎并发症而死亡［１］。故有必要对患者进行早期病原诊断，以利于早期治疗。腮腺炎病毒ＲＮＡ中小疏水蛋白（ＳＨ）基因作为高变区在不同毒株的分子特性鉴别中比其它基因片段更...
39卷第1期 (2024年2月)
ISSN 1674-0769
EISSN 1995-820X
CN 42-1760/Q
主编: 石正丽
影响因子: 5.5*
*源于2022年JCR
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