1995年10卷4期
通过乙脑病毒Ｐ＿３株以不同方式在鼠脑和Ｖｃｒｏ细胞间传代适应的研究，培育出适于工业化大生产制备乙脑疫苗的生产毒种。其毒力可达７．０±０．５ｌｇＬＤ５０／０．０４ｍｌ，空斑滴度为７．５±０．５ＰＦＵ／ｍｌ，免疫原性ＩＤ５０值为０．００００１６－０．００００２３ｍｌ；在含有适量人白蛋白的１９９营养液内，该毒种于－３０℃至少可稳定一年；与鼠脑组织毒种相比，传代细胞毒种的毒力、免疫原性及稳定性均与其相当。然而，后者不含脑组织，至少降低了一种过敏的危险。另外，细胞毒种的制备无需手工解剖鼠脑，易于控制外源因子污染，易于标准化。对于大规模生产疫苗、提高疫苗产量和质量，传代细胞毒种比鼠脑组织悬液毒种具有明显的优点。
采用流行性出血热病毒（ＥＨＦＶ）１１４株实验感染家兔，用免疫荧光法（ＩＦＡ）及ＰＡＰ双桥法对家兔各脏器组织进行病毒抗原定位，同时将各脏器石蜡切片作常规Ｈ－Ｅ染色，观察受检组织的病理变化。结果表明：家兔在感染后７－１５天中，用ＩＦＡ法在胸腺、心、肺、肝、脾、胰腺、淋巴结、脑、睾丸、卵巢、肾、大肠及小肠中均检出ＥＨＦＶ抗原。用ＰＡＰ双桥法在细胞水平进行病毒抗原定位，发现所有受检组织小血管及毛细血管内皮细胞均为ＥＨＦＶ的原始靶细胞。生殖腺实质细胞病毒抗原阳性，为ＥＨＦＶ的垂直传播提供了实验依据。从肺支气管粘膜内皮细胞、尤其是腔面的纤毛柱状上皮内检出病毒抗原。推测ＥＨＦＶ通过气溶胶造成传播可能是水平传搐的方式之一。病理学初步观察，各脏器组织细胞未发现不可逆的病理损害。
观察了用１２５Ｉ标记的受体导向药物──乳糖化人血清白蛋白单磷酸阿糖腺苷（Ｌ－ＨＳＡ－ＡｒａＡＭＰ，简称交联物）在小鼠体内的分布情况，结果显示在肝肮内含量明显高于其它各脏器，表明药物的肝脏导向性能良好。同时观察到药物具有缓慢释放作用，从而增强了药效。用乙肝病毒ＤＮＡ转染的肝癌细胞（２．２．１５细胞）观察交联药物的抗病毒药效，结果显示交联物与ＡｒａＡＭｐ具有相似的抗病毒效应。两药对ＨＢｓＡｇ的抑制率分别为５０％、６３％，对ＨＢｅＡｇ为６２．６％、６７．２％。５００μｇ／ｍｌｕ交联物（其中含ＡｒａＡＭｐ为３１．３μｇ／ｍｌ）与１００μｇ／ｍｌＡｒａＡＭＰ对ＨＢＶＤＮＡ具有相似的抑制作用。两药对ＨＢｃＡｇ抑制的选择指数分别大于４．８、１．７。显示交联物比ＡｒａＡＭＰ，在药效相似情况下可明显减少用量，降低毒性，延长作用时间。
对戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）编码蛋白序列进行了亲水性分析及二级结构预测，选择亲水性强、具有β－转角与β－折叠的区段，采用多肽固相合成法合成了ＨＥＶ基因组３个开读框架（ＯＲＦ１，ＯＲＦ２和ＯＲＦ３）中可能的抗原表位，以免疫学方法进行鉴定并选出了分别来自ＨＥＶ３个ＯＲＦ的、具有重要生物活性与应用前景的３段肽（ＥＨ１７４、ＥＨ２６５、ＥＨ３６２）。在此基础上，进行了抗ＨＥＶＥＬＩＳＡ新型检测试剂盒的实验室研究及临床试用。结果表明，所研究的戊肝抗体检测试剂盒特异性高、临床符合性好、具有可重复性，在戊肝辅助诊断及流行病学调查中具有重要意义。
用人重组肿瘤坏死因子－α（Ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－α，ＴＮＦ－α）和人天然α干扰素（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－α－，ＩＦＮ－α）在人胚胎肺纤维母细胞（ＨＥＦ）和Ｈｅｐ－２细胞系上对常见呼吸道病毒所致细胞病变抑制进行比较观察。病毒包括不同型别的腺病毒５株，单疱病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－Ｉ）１株，鼻病毒１株，仙台病毒１株，ＶＳＶ１株。结果提示ＴＮＦ－α和ＩＦＮ－α均具有广谱抗病毒活性。ＴＮＦ－α的抑毒作用能被ＴＮＦ－α申抗和ＩＦＮ－β单抗完全去除，被ＩＦＮ－α单抗部分去除ＴＮＦ－α的抗病毒效应。ＴＮＦ－－α中和试验的结果提示：ＴＮＦ抗病毒活性仍为ＩＦＮ－β诱生所介导。
采用流行性出血热病毒（ＥＨＦＶ）１１４株实验感染家兔，用免疫荧光法（ＩＦＡ）及ＰＡＰ双桥法对家兔各脏器组织进行病毒抗原定位，同时将各脏器石蜡切片作常规Ｈ－Ｅ染色，观察受检组织的病理变化。结果表明：家兔在感染后７－１５天中，用ＩＦＡ法在胸腺、心、肺、肝、脾、胰腺、淋巴结、脑、睾丸、卵巢、肾、大肠及小肠中均检出ＥＨＦＶ抗原。用ＰＡＰ双桥法在细胞水平进行病毒抗原定位，发现所有受检组织小血管及毛细血管内皮细胞均为ＥＨＦＶ的原始靶细胞。生殖腺实质细胞病毒抗原阳性，为ＥＨＦＶ的垂直传播提供了实验依据。从肺支气管粘膜内皮细胞、尤其是腔面的纤毛柱状上皮内检出病毒抗原。推测ＥＨＦＶ通过气溶胶造成传播可能是水平传搐的方式之一。病理学初步观察，各脏器组织细胞未发现不可逆的病理损害。
本文报道人疱疹病豢－６型（ＨＨＶ－６）ｐＳＴＹ２８ＤＮＡ片段的序列测定。应用分子克隆、缺损突变体（Ｄｃｌｅｔｉｏｎｍｕｔａｎｔ）制备和序列测定等技术，完成了３．９ｋｂＨＨＶ－６ｐＳＴＹ２８ＤＮＡ片段的全序列测定。经ＤＮＡＳＩＳ核酸蛋白软件分析，该片段含有两个开读框架（ＯＲＦ）核糖核苷酸还原酶（ＲＩＲ）ＯＲＦ有２４１４个核苷酸，可编码８０５个氨基酸；Ｐ４１蛋白由１１００个核苷酸组成。与其他疱疹病毒作氨基酸同源性比较，ＨＨＶ－６ＲｉＲ与人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）有高度同源性，最适记分（Ｏｐｔｉｍｉｚｅｄｓｃｏｒｅ）达４５９。实验结果支持Ｅｓｆｔａｔｈｉｏｕ提出的论点，ＨＨＶ－６属于－疱疹病毒。
用含谷胱甘肽转硫酶（ＧＳＴ）基因的ｐＧｅｘ－２Ｔ为表达载体在大肠杆菌中高效表达了含ＨＣＶ核心区部分基因片段（约１２２个氢基酸）的融合蛋白，表达产物Ｃ２７经测定占菌体总蛋白的３０％，Ｃ２７纯化后，用我国ＨＣＶ诊断试剂第二代血清参考品为标准与Ｇ１１核心抗原进行比较，结果显示二者具有相同的总体检出率和近似的抗原活性。因此，推测表达的部分区段基因可能是核心区重要功能区域。另外融合蛋白对提高重组蛋白的抗原活性和分离纯化等均有一定作用。
应用ＰＣＲ技术定向克隆了细小病毒Ｈ－１的非结构蛋白（ＮＳ）部分基因片段。自行设计并合成了ＰＣＲ引物△Ｐ３和△Ｐ４，在两个引物中分别引入两个突变碱基，使扩增后的ＤＮＡ片段的两端含有限制性核酸内切酶ＨｉｎｄⅢ或ＢａｍＨＩ的酶切位点，经双酿切法把该ＤＮＡ片段重组到ｐＵＣ１１８质粒中。对插入片段的ＤＮＡ序列测定和分析结果证实该片段为Ｈ－１ＮＳ－１基因序列。以此重组质粒为探针，采用分子杂交的方法，分别测定了Ｈ－１及ＭＶＭＤＮＡ在细胞内的复制水平。这一基因的克隆为制备Ｈ－１的质量监测、Ｈ－１及ＭＶＭＮＳ－１蛋白抑瘤作用机理及其在肿瘤细胞及正常组织中的转录表达等研究奠定了基础。
１９８３－１９９１年间，国家６５－７５重点科技攻关项目协作组，在京、津、辽、苏、吉、新六个地区，采集辣（甜）椒病毒病标样３６１８个，采用三常规（生物、血清、电镜）鉴定手段分离出烟草花叶病毒（ＴＭＶ）、黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）、马铃薯Ｘ病毒（ＰＶＸ）、马铃薯Ｙ病毒（ＰＶＹ）、烟草蚀纹病毒（ＩＥＶ）、苜蓿花叶病毒（ＡＭＶ）、蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）、烟草脆裂病毒（ＴＲＶ）等八种病毒；描述了它们的生物学、血清学、电镜学性状及危害辣（甜）椒的特性；分析了各类病毒在不同地区、季节的消长规律，明确了各地辣椒上的主导病毒病原，为抗病育种及制定综合防治措施，提供了科学依据。
１９９１－１９９３年在黑龙江省主要烟区的１１个县及长春市采样，得１２９个毒株。经鉴别寄主测定，抗血清反应（板式酶联法或斑点酶联法）及电镜或免疫电镜观察，有ＴＭＶ（４３．４％），ＰＶＹ（１７．８％），ＣＭＶ（３．９％），ＴＲＶ（０．８％），ＴＳＷＶ等病毒，ＴＭＶ与ＰＶＹ混合侵染的占１０．１％，ＰＶＹ与其它病毒混合侵染的占１１．６％，另有５个标样为马铃薯Ｙ病毒组成员，１０个为未知。
利用简并引物ＲＴ－ＰＣＲ扩增技术，结合ＲＴ－ＰＣＲ扩增片段ＲＦＬＰ分析，对洋水仙１４个病毒病样品进行分组检测。结果表明洋水仙植物上存在有四种以上ＰＶＹ组病毒侵染。它们可能是ＴＢＶ、ＮＹＳＶ、ＮＳＳＶ和ＯｎＹＤＶ等。
用ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ检测牛白血病病毒的前病毒形式。从牛白血病病毒基因ｇｐ５１上选择两对引物进行ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ体外扩增，产物经２％ａｇａｒｏｓｅ凝胶电泳和用生物素标记的探针鉴定，证实其特异性。结果表明该方法能从两个ＢＡＴ－ＢＬＶ细胞内检测出ＢＬＶ的前病毒ＤＮＡ形式。
从感染致病的中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｓｉｓ）中分离到一种球状病毒，其育径约为２０±４ｎｍ。进行人工感染实验，对虾死亡率为６６％；用脱氧核糖核酸酶（ＤＮａｓｅ），核糖核酸酶（ＲＮａｓｅ）及二苯胺染色法对病毒核酸进行处理，证明该病毒核酸为脱氧核糖核酸，用Ｓｌ核酸酶（Ｓｌｎｕｃｌｅａｓｃ）对该核酸进一步消化处理，进一步证实该病毒含单链ＤＮＡ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果显示，该病毒含４条结构多肽，其分子量分别为８６ｋＤ，７９ｋＤ，７０ｋＤ及２５．５ｋＤ。根据上述特性分析，该病毒可能属于细小病毒科（ｐａｒ－ｖｏｖｉｒｉｄａｅ），故暂定名为中国对虾细小病毒（ＰｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｓｉｓＰａｒｖｏｖｉｒｕｓ简称ＰｃＰＶ）。
利用１５株不同品系的噬菌体作筛子筛选的噬菌体抗性自发突变株只对其相应的筛于噬菌体具抗性，为窄谱抗株。利用原生质体融合技术把北京棒杆菌７３３８与钝齿棒杆菌Ｔｓ－Ｌｉ进行融合得融合于ＺＧ８８，通过噬菌体吸附试验，血清学试验证明ＺＧ８８细胞表面结构发生了较大的改变，失去了噬菌体的吸附位点。因此ＺＧ８８是广谱稳定的噬菌体抗性菌株。
侵染菊花的黄瓜花叶病毒的初步鉴定和血清学检测张海保，朱西儒，张云开（中国科学院华南植物研究所广州５１０６５０）关键词菊花，黄瓜花叶病毒，间接ＥＬＩＳＡ菊花（Ｃｈｒａｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍ）病毒病是危害菊花的一类主要病害。国外文献报道...
39卷第1期 (2024年2月)
ISSN 1674-0769
EISSN 1995-820X
CN 42-1760/Q
主编: 石正丽
影响因子: 5.5*
*源于2022年JCR
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