1999年14卷3期
昆虫杆状病毒增效蛋白(enha~cin)曾被称为病毒促进因子(synergistic tactor，SyF)或病毒增效因子(vir~enhancing factor，vEF)．它长期以来被认为只存在于昆虫颗粒体病毒(Granu．]osis virus，GV)中的一类蛋白质，已知有8种GV 中含有增效蛋白。自TanadalI 1959年从
美洲一星粘虫(Pseudaletla unipuncta，Pu)GV 中分离出增效蛋白并证实它有增强PuMNPV的感染力后，一直很受人们关注。从它的作用机理到氨基酸序列和基因结构等方面都进行了大量研究。9D年代初，Hashimoto 和Roe[rink 等人先后分别对粉纹夜蛾GV(Trichopzusia
ni GV，TnGV)和PuGV、棉铃虫GV(1-leliothis armigera，HaGV)的增效蛋白基因进行了克隆和测序．并对它们的氨基酸序列进行了分析，发现三者间有很大的同源性和相似性。Roelvink 等人还在另外两种GV．／J、菜粉蝶GV(P扫 rapae，Pira GV)和旋幽夜蛾GV(Sco
togrammatrifolii GV，Sctr GV)中检出有增效蛋白的存在。虽然在昆虫痘病毒(en10一mopoxvirus．EPV)中也有类似的具增效作用的蛋白成分 】，但它与GV的增效蛋白不同，而在核型多角体病毒(Nuclear polyhedrosis virus，NPV)中长期未见报道。直至1997年，Bischoff【8_等人从一种舞毒蛾NPV(LymantHa dispar MNPV．LdMNPV)基因组中克隆出一个增效蛋白基因．并对它进行了核苷酸和氨基酸序列分析，发现LdMNPV的增效蛋白基因结构和已测序的3种Gv(Tn GV，PuGV．HaGV)的增效蛋白基因结构很相似；它与GV的氨基酸序列也有29％的同源性。随后，他们又对LdMNPV的增效蛋白基因进行了表达【9 J。在NPV中发现增效蛋白及其基因尚属首倒．这一发现对增效蛋白及对GV与MNPV之间关系的研究有重大意义。本文主要对LdMNPV增效蛋白的基因结构、氨基酸序列作一介绍，并与已知的3种GV作一比较。
病毒的命名过去不够统一，有些病毒是以宿主、病理特点、致病症状、病毒颗粒形态进行命
名，有些病毒是以地名和人名进行命名，还有些病毒是以字母和数字命名。病毒的分类系统也
不一致，动物病毒分类等级设立科、屑、种；而植物病毒分为组、亚组、种。为了力求分类和命名
的统一，1992年Martelli首先提出了植物病毒的科、属、种分类原则，1993年8月在英国格拉
斯哥召开的第9届国际病毒大会上，国际病毒分类委员会(ICTV)采纳了这一分类原则，并且
新设立了一些植物病毒的科、属lI J，1995年在ICTV所公布的病毒分类和命名第六次报告中，
植物病毒分类已不再采用组、亚组，而统一使用科、属、种分类系统f2l。病毒的分类系统也开
始逐渐向更高级的分类等级发展，1991年I Ⅳ 在病毒分类和命名第五次报告中首次公布了
比科更为高级的分类等级，单分子负链RNA病毒目(Mononegavirales) J，最近ICTV 又先后
增设了套病毒目(Nidovirales)? 和有尾噬菌体目(Caudovirales) J。除此以外，1996年8月
I Ⅳ 在第10届国际病毒大会上还对原有的病毒分类和命名规则作了进一步的修订，提出了
38条新的病毒命名规则 1。最近据Mayo等报道，ICTV 又批准了43条新的病毒分类和命名
规则，同时对病毒目、科、属和种名的书写也作了专门的规范 l。
测定7例慢性HBV携带者HBV基因组全序列，经同源性比鞍．确定基因型。2例基因型为B型，余均为C型：血清型adr 4例．adw 3例 备序列问X基因差异蛀大 未见A 撕、TⅢ2AI 64等重要位点的变异。结合已有的2株HBV中国流行株全基因序列，初步建立以中国流行株序列为基础的HBV标准序列，该标准序列与国外标准序列仅商22个位点的差异。
利用高效持续带毒增殖的细胞株传代增殖获取甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）。采用不连续蔗糖／甘油密度梯度超速离心分离高度纯化的ＨＡＶ颗粒。温和病毒裂解液裂解病毒后，运用高效液相色谱分离出三种蛋白，ＳＤＳＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实所分离蛋白为ＨＡＶ三种主要结构蛋白ＶＰ１、ＶＰ２和ＶＰ３，蛋白含量较高。
根据小麦黄花叶病毒（ＷＹＭＶ）核苷酸序列测定结果，将ＷＹＭＶＲＮＡ２上的２８ｋＤａ蛋白基因克隆到ｐＥＴ１１ａ上，构建了原核表达载体ｐＥ２８３９。ＳＤＳＰＡＧＥ分析表明，经ＩＰＴＧ诱导，２８ｋＤａ蛋白基因在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中得到高效表达。以含表达产物的凝胶为抗原，免疫家兔，首次制备了小麦黄花叶病毒ＲＮＡ２蛋白特异性抗血清。
应用差别ｐＨ值沉淀蛋白质的原理，建立了水稻条纹病毒病特异蛋白（ＳＰ）的两种提纯方法。这两种方法都可以从病叶中提纯到大量的ＳＰ，其粗提纯量分别为０．８和２．０ｍｇ／ｇ病叶。通过ＳＤＳＰＡＧＥ分离后得到了精提纯的蛋白，其分子量为２０．１ｋＤａ。将粗提纯和精提纯的ＳＰ分别免疫兔子，制备出效价为５１２００和６４００的抗血清。将效价为６４００的高度特异性的抗血清用于研究ＲＳＶＳＰ与ＲＳＶＣＰ及同属的水稻草状矮化病毒（ＲＧＳＶ）ＳＰ、ＣＰ之间的血清学关系，结果表明，ＲＳＶＳＰ的抗血清与ＲＧＳＶＣＰ、ＲＳＶＣＰ之间无反应，但可与ＲＧＳＶＳＰ微弱反应；而ＲＧＳＶＳＰ、ＣＰ及ＲＳＶＣＰ的抗血清与ＲＳＶＳＰ之间都无血清学反应。结果证实了ＲＳＶ和ＲＧＳＶ之间存在着进化上的亲缘关系
将猴艾滋病Ｄ型逆转录病毒（ＳｉｍｉａｎＡＩＤＳｔｙｐｅＤｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ，ＳＲＶ１）感染的Ｒａｊｉ细胞进行选择性抽提制备成核骨架中间纤维这一细胞内骨架系统，再结合常规电镜技术和ＤＧＤ包埋去包埋剂电镜技术，对此病毒在宿主细胞内的装配和释放与这一骨架系统的关系进行了研究。结果表明ＳＲＶ１病毒核壳体的装配是在细胞核附近的胞质中进行的，其装配中心是结合在胞质骨架的中间纤维上，正在装配的和已装配好的病毒核壳体都是紧密结合在中间纤维上的。而在核内骨架系统中未观察到病毒粒子。这表明ＳＲＶ的装配可能是依赖于胞质中的中间纤维作支架，且装配好的核壳体可能沿着中间纤维被运送至质膜内侧或胞质内病毒感染后形成的空泡膜上，然后出芽释放
蛋白多肽二级结构的电脑预测表明，非洲猪瘟病毒（Ａｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ，ＡＳＦＶ）ｊ５Ｒ阅读框编码１２．９ｋＤａ膜蛋白。该蛋白的Ｃ末端含有一个潜在抗原决定簇，针对其合成肽的抗体能在ＡＳＦＶ感染细胞和病毒颗粒中检测到２３或２５ｋＤａ（取决于不同毒株）特异蛋白。免疫荧光试验显示，ｊ５Ｒ蛋白主要位于感染细胞的病毒复制部位。油水两相分离和细胞分级分离试验结果证明ｊ５Ｒ蛋白是膜相关蛋白
以ＰＲＲＳＶ弱毒株膜蛋白（Ｍ）和核衣壳（Ｎ）蛋白基因为模板，设计的一对含有ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ酶切位点的引物，通过ＲＴＰＣＲ扩增出一约９００ｂｐ的ＭＮ基因片段，将此基因片段成功克隆于高效表达载体ｐＢＶ２２０，构建成重组质粒ｐＢＶＭＮ，导入大肠杆菌ＤＨ５，经温敏诱导，成功地表达了ＭＮ基因。表达产物经ＳＤＳＰＡＧＥ电泳和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ印迹分析，其分子量约３４ｋＤ，与兔抗ＰＲＲＳＶ高免血清发生反应，经光密度扫描分析，表达产物量占菌体总蛋白的１２％。该研究为ＰＲＲＳ基因诊断抗原的研制奠定了基础
用瞬时表达分析等方法，证明牛泡沫病毒（ＢＳＶ）３０２６中国毒株能在体外激活牛免疫缺陷病毒（ＢＩＶ）基因表达，ＢＳＶ３０２６编码的反式激活因子Ｂｏｒｆ１行使这种激活作用。缺失突变分析表明，Ｂｏｒｆ１在ＢＩＶＬＴＲ上靶序列位于－４１０／－１１５（＋１为转录起始位点）区域，但其中的ＮＦＢ位点（－３６７／－３１９）与这种激活作用无关，包括转录起点下游（ＲＵ５区）在内的－１１５／＋２０４区域也与这种激活作用无关。该结果对研究ＢＩＶ致病机理及防治ＡＩＤＳ有重要意义。
将含有鸡传染性支气管炎病毒Ｓ１基因ｃＤＮＡ的重组转移质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ和ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３／４Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ分别与粉纹夜蛾核型多角体病毒ＴｎＮＰＶＳＶＩ－ＧＤＮＡ（ＯＣＣ－，ｇａｌ＋）共转染草地夜蛾（Ｓｆ９）细胞，经空斑纯化得到重组病毒ＴｎＮＰＶ（Ｘ３）Ｓ１．ＨｏｌｔｅＯＣＣ＋和ＴｎＮＰＶ（Ｘ３／４）Ｓ１．ＨｏｌｔｅＯＣＣ＋。将重组毒株分别感染Ｔｎ５Ｂ１细胞，并进行ＳＤＳＰＡＧＥ与Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测。结果表明，ＴｎＮＰＶ（Ｘ３／４）Ｓ１．ＨｏｌｔｅＯＣＣ＋在感染的细胞中高效表达了Ｓ１蛋白，ＳＤＳＰＡＧＥ凝胶薄层色谱分析结果显示，感染病毒后７２ｈＳ１蛋白的表达量占细胞内总蛋白量的３５．８％，而ＴｎＮＰＶ（Ｘ３）Ｓ１．ＨｏｌｔｅＯＣＣ＋感染的细胞内检测不出Ｓ１蛋白。经分析认为这一差异主要来自Ｓ１基因翻译起始位点及其附近的周围环境。
应用聚合酶链反应技术，用设计带有限制性酶切位点的引物，特异地扩增从起始密码子开始的１．８ｋｂ新城疫病毒（ＮＤＶ）血凝素神经氨酸酶（ＨＮ）基因开放式阅读框，然后插入ｐＴＫ２Ｂ的ＮｈｅⅠ位点，构建了含ＮＤＶＨＮ基因的插入载体ｐＴＫＨＮ１和ｐＴＫＨＮ２，再与感染火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）细胞的总ＤＮＡ共转染鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），经有限稀释法和Ｄｏｔｂｌｏｔ筛选，得到含有ＨＮ基因的重组体ｒＨＶＴ１和ｒＨＶＴ２。经组织培养传代和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析，表明重组体在感染细胞中表达了ＨＮ蛋白。重组体在ＣＥＦ上的生长特性与亲本病毒相同，且在连续传代过程中保持稳定。为国内新城疫基因工程疫苗研制奠定了基础。
１９９５年作者从湖北濒死鹦鹉体内分离到一株新病毒，经鹦鹉胚成纤维细胞盲传四代过渡到鸡胚成纤维细胞，再传至第五代出现细胞病变。适应细胞的病毒纯化后，经ＳＤＳＰＡＧＥ分析，发现病毒粒子结构蛋白由８条多肽组成，分子量范围在１４．５～６０ｋＤ之间。病毒的酸碱氨基酸之比为２．５１，富含Ａｓｐ、Ｃｌｕ和Ｌｅｕ，而Ａｒｇ和Ｍｅｔ含量较少。病毒核酸为双链ＤＮＡ，存在超螺旋型、环型和线型三种形态，Ｇ＋Ｃ的含量为４５％。经限制性内切酶分析，核酸的分子量为３．３１０６Ｄ。根据病毒分类的标准确认为澳州长尾小鹦鹉幼雏病病毒，应归属于乳多空病毒科多瘤病毒属。
酵母菌ＳＨ２发酵产物（简称ＦＳＨ２），用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５凝胶层析和ＨＰＬＣ色谱层析分离纯化，收集到一组蛋白。该组蛋白在ＰＡＧＥ和ＳＤＳＰＡＧＥ电泳上带型一致，无蛋白亚基，分子量范围为５２～７２ｋＤ。凝胶上糖蛋白的特异性染色Ｓｃｈｉｆｆｓ染色显示阳性染色带；用Ｌｏｗｒｙｓ法测蛋白和硫酸酚法测糖，显示蛋白与糖的比例约为３∶１。该组蛋白与人干扰素作用，增强干扰素生物学效价分别为１．６～２．８倍和１．４～４．０倍；经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５凝胶层析的ＦＳＨ２蛋白洗脱峰增效２．０１～５．６８倍；发酵液增效１．６４～６．８６倍。并证实酵母菌ＳＨ２增效干扰素的活性成分为５２～７２ｋＤ分子量范围的胞外糖蛋白（简称ＹＥＧＰｓ）。
核型多角体病毒有单核衣壳包埋型和多核衣壳包埋型之分，单核衣壳包埋型是在一个病毒囊膜内只包含一个核衣壳，而多核衣壳包埋型的特点是在一个病毒囊膜内包含有２个以上的核衣壳，由于多个核衣壳成束地被包装在同一个病毒囊膜内，又称病毒束［１，２］。Ｈｕｎｔｅｒ等表...
39卷第1期 (2024年2月)
ISSN 1674-0769
EISSN 1995-820X
CN 42-1760/Q
主编: 石正丽
影响因子: 5.5*
*源于2022年JCR
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