2003年18卷4期
摘要：本文研究了巨细胞病毒感染人二倍体细胞MRC一5后诱导产生高水平Cyclin E，Cyclin E／cdk2激酶活性增加 和导致细胞周期阻滞。应用流式细胞仪分析表明10PFU／cell的病毒量感染MRC一5细胞72h后，29％细胞位于S期， 69％细胞位于G2／M 期，只有2％细胞位于Gl／G0期。 应用双抗夹心ELISA法检测，感染病毒20h后，MRC一5细 胞中Cyclin E含量比对照细胞高出8倍。感染细胞中CyclinE／cdk2激酶活性基本上与CyclinE含量相关联。
为研究汉滩病毒对肿瘤细胞的诱导凋亡作用，以一定量病毒悬液感染体外培养的SP2／O细胞，接种后一定 时间将细胞消化甩片行Gimsa染色观察凋亡细胞核的变化，制细胞悬液以流式细胞仪测细胞周期，并用免疫组化 的方法检测凋亡分子Fas和FasL的表达。 结果示经病毒诱导后细胞出现生长特性及形态学变化，Giemsa染色 观察到典型凋亡细胞：流式细胞仪显示有凋亡峰出现；免疫组化检测出感染后SP2／O细胞中Fas和FasL表达明显 升高。该结果表明汉滩病毒可诱导体外培养SP2／O细胞凋亡，其发生可能与凋亡分子Fas和FasL有关。
以ECV304 细胞为对象分析登革病毒感染血管内皮细胞的机制。2型登革病毒(DEN2)吸附后微量蚀斑法 测定ECV304 细胞上清释放的病毒滴度，证实该细胞对DEN2感染有一定的敏感性。机械刮取或胰蛋白酶消化法 收集ECV304 细胞分离膜蛋白，SDS—PAGE见胰酶处理样品缺失一43 kDa的膜蛋白。将ECV304 细胞膜蛋白与 S-Met标记的DEN2进行病毒重叠蛋白结合试验(VOPBA)，有29、34和43 kDa的3种膜蛋白可与DV结合， 其中29 kDa的蛋白对胰酶耐受。培养的ECV304 细胞中加入重组E蛋白(rEgp)对DEN2吸附进行阻断试验， 微量蚀斑法与间接免疫荧光表明rEgp抑制DEN2感染该细胞。VOPBA中rEgp可阻断病毒与细胞膜蛋白的结合。 结果表明ECV304 细胞表面可能存在29、34、43 kDa的3种与DEN2结合的相关蛋白，DEN2 E蛋白可直接介 导DV感染血管内皮细胞。
为鉴定我国森林脑炎病毒亚型，了解基因组结构与生物功能的关系， 同时为森林脑炎病毒新型疫苗研制打 下基础，对森林脑炎病毒森张株编码区序列进行测定。根据已发表的S in-HO、Oshima5．10株序列设计9对重 叠引物，通过RT．PCR扩增不同的cDNA片段，分别克隆至pGEM~-T载体，转化DH5 Q菌，挑阳性克隆PCR、 酶切鉴定后测序。结果表明森张株编码区全长10 245nt，编码3 414个氨基酸。我国森林脑炎病毒森张株与 Oshima5．10、Sofjin．HO、SoOin同源性最近，属于远东亚型。
将丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(Core)基因的全长序列插入到真核表达载体pCDNA3 CMV启动子下 游，构建真核表达载体pCDNA3．Core，用脂质体LipoVec 。M转染Cos一7细胞系进行瞬时表达；DNA转染24h后 用免疫斑点试验检测在细胞中表达的Core蛋白；转染72h后用Hoechst染色和DNA Ladder检测Cos一7细胞的凋 亡情况；荧光染色观察到了细胞凋亡核碎裂，琼脂糖凝胶电泳也呈现出180—200bp整数倍的梯形带，呈现典型的 细胞凋亡特征。这些结果表明HCV Core蛋白的表达能引起Cos一7细胞凋亡，Core蛋白的这种功能可能在HCV 的持续感染过程中起着一定的作用。
摘要：本文利用生物信息学方法比较SARS病毒和其他冠状病毒基因组。通过数据库搜索，找出与SARS病毒基因组相似的核酸或蛋白质序列，并对相似序列进行比对，分析它们的共性和差异。结果表明，SARS病毒在基因组的组织上及结构蛋白质方面与现有冠状病毒有比较大的相似性，SARS病毒基因组与冠状病毒基因组相关。但是，SARS病毒基因组还存在一些特异性序列，ORFla和S蛋白(特别是S1)的变化以及SARS．CoV特异性的非结构蛋白可能是SARS 发病机理与传染特性区别于其他冠状病毒的分子基础。在全基因组水平上进行核酸单词出现频率分析，结果表明，SARS 病毒远离已知的其他冠状病毒， 单独成为一类。
摘要： DpCPV杀虫剂的产量不仅受到气候、环境等因素的影响，而且严重受到生产工艺技术水平的制约。针对 DpCPV 杀虫剂生产过程中工艺技术问题，我们对马尾松毛虫质型多角体病毒湖南株在室内、室外和林间大量增 殖中的集虫虫质、接种浓度、频率、收获时间等及其相互间的关系进行了详细研究，得出在DpCPV 杀虫剂生产 过程中接种1×10 CPB／mL病毒浓度为宜，接种虫龄以4-5龄虫为宜，收获病毒时间13 14d为宜。其室外单虫病 毒产量平均可达到7．5×10。CPB， 比国内报道要高。研究结果对DpCPV杀虫剂的高产增殖有很强的指导意义
摘要：应用基因重组技术，构建增强绿色荧光蛋l~(EGFP)与人乳头瘤病毒16型E7(HPV16E7)的重组融合表达质粒，经限制性内切酶酶切鉴定和PCR 分析后，用基因转染技术将其导入小鼠肝癌细胞，荧光显微镜下观察融合蛋白的表达。酶切鉴定和PCR 分析证实重组质粒中插入目的基因片段的大小、方向和插入位点均正确，在转染的小鼠肝癌细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达。构建的pEGFP．HPV16E7融合表达质粒能直观地反映转染细胞中EGFP-HPV16E7融合蛋白的表达。由于转化率与表达率融为一体，故有利于对转染细胞的筛选，缩短转染细胞在体外的筛选的时间适用于对HPV16E7 分子生物学特性、致瘤机理及APC 提呈等的研究。为建立表达HPV16E7的实体瘤动物模型奠定了基础。
摘要：为了充分利用棉铃虫核型多角体病毒(Helicoverpa armigera，HaSNPV)资源，为开展害虫生物防治提供依 据，对首次在朝鲜分离到的棉铃虫核型多角体病毒进行了研究。本文从形态结构，结构多肽。核酸限制性内切酶 图谱等方面进行了研究。多角体直径0．36—1．3pm，平均1．02pm，病毒粒子大小为326 nm×69nm。经SDS—PAGE 分析，棉铃虫核型多角体朝鲜株多角体蛋白为一条带。多角体蛋白分子量为28．7kDa。棉铃虫核型多角体朝鲜株 基因组经BamH I，EcoR I,HindlII和Psi I消化后，得到的内切酶图谱表现，与已报道的几个分离株比较类似。 分子大小均为130．18kb。
摘要：通过差速离心从感染的马尾松毛虫幼虫虫体中提取质型多角体病毒。碱解法提纯病毒粒子，1％琼脂糖凝胶 分离基因组dsRNA，回收纯化第五片段(S5)。根据同源性设计五对引物，经RT．PCR，最终获得五个亚克隆片断， 测序拼接后，得到S5全长。片断全长2851个核苷酸，包括一个2643个核苷酸的开放阅读框。推测DpCPV S5 基因编码了881个氨基酸长的多肽，分子量为100．3kDa，与舞毒蛾质型多角体病毒(LdCPV一1)和家蚕质型多角 体病毒(BmCPV)比较，核苷酸和氨基酸的同源性都很高。进一步分析，利用几种CPV序列绘制了系统进化树， 对病毒的分类和进化做了探讨研究
摘要：1999年6月，天津医科大学动物中心饲养的珍贵灵长类实验动物—— 普通棉耳狨猴群体中暴发急性呼吸道 传染病，病死率高达33％。在排除细菌感染的基础上，通过死亡狨猴肺组织匀浆接种鸡胚和MDCK 细胞的分离 培养，分离出一株具有高血凝效价的病毒株。经双份血清试验及动物接种试验，确认该病毒是本次疾病流行的病 原体。又进一步通过与常见呼吸道病毒标准毒株及血清进行交叉血凝抑制试验、电镜观察、RT—PCR 技术并结合 生物信息学方法对该毒株进行鉴定，确认本次疾病流行的病原体是副流感1型病毒中的仙台病毒。
在对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus，wssv)的基因组中发现一个具有细胞因子受体特征的开 放阅读框，该阅读框全长2022个核苷酸，编码674个氨基酸，蛋白质理论分子量为76kDa。该基因含有真核生 物细胞因子gpl30受体特征序列。为了研究该基因的功能， 采用PCR 方法从病毒基因组中扩增出基因片段，克 隆到pGEM．T Easy载体中，经BamH I和Sal I双酶切后插入pET28b表达载体中。重组质粒转化到大肠杆菌BL21 中，IPTG诱导后，经SDS．PAGE电泳表明在76kDa处有目的蛋白表达。用冰浴超声波对诱导后的菌液进行处理 以获得初步纯化的蛋白，作为抗原人工免疫实验兔子以获得含特异性抗体的抗血清。该基因的表达成功，为其功 能的进一步深入研究奠定了基础。
摘要：根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV．2)ORF2基因序列，设计了1对引物，应用PCR从含有PCV．2 的PK．15细胞中扩增出ORF2基因，将其克隆入pSecTag2载体中，构建了pSecORF2载体。又设计一条含信号肽 序列的上游引物， 以pSecORF2为模板，扩增出含信号肽序列的ORF2基因，将其克隆到plREShyg载体上，构 建了plRESiORF2真核表达载体。然后通过磷酸钙共沉淀法转染CHO细胞，进行表达。间接免疫荧光实验(IFA) 成功检测到plRESiORF2在CHO细胞中的表达。这为进一步研究ORF2编码蛋白的生物学活性及建立PCV诊断 试剂盒打下基础。
摘要：本研究通过PCR扩增出猪圆环病毒2型(PCV一2)的全基因组(1 768bp)，克隆入pcDNA3载体的EcoR I 酶切应点，获得含有PCV．2全基因组的重组质粒，命名为pcDNApcv2。将重组质粒大量扩增后，用EcoR I切出 l 768bp的PCV一2全基因组，在体外用T4 DNA连接酶使其连接环化。用脂质体法将体外连接产物转染无PCV污 染的PK一15细胞，经4次连续传代，用间接免疫荧光实验(IFA)及电镜观察证实已获得复制能力的PCV一2病毒。 由此可见，本试验构建的环化的PCV．2全基因组DNA具有感染性。
摘要：测定了来源于我国水稻条纹叶枯病常年流行区的云南楚雄(CX)及病害暴发区的江苏洪泽(HZ)的水稻 条纹病毒(RSV)2个分离物RNA2全长序列，其长度分别为3506bp和3514bp。与已报道的日本T和O分离 物RNA2序列进行比较的结果表明，这4个分离物可分为两组，其中，HZ、T和O分离物为一组，组内分离物 之间，RNA2的毒义链(vRNA2)及RNA2的毒义互补链(vcRNA2)上的ORF的核苷酸一致性分别为97．2％～98．O％ 和96．8％～97．1％，5 端和3 端非编码区的序列则完全一致。但HZ分离物与T分离物的亲缘关系更为密切，其基 因间隔区(IR)与T和O分离物的等长。另一组为我国CX分离物，组与组之间，vRNA2及vcRNA2上的ORF 的核苷酸一致性分别为95．0％～95．7％和93．9％～94．4％。CX分离物的IR与HZ分离物相比缺失了一段8 nt的片段。 5 端非编码区的序列完全一致，但3 末端非编码区有一个碱基的差异。这些结果表明，RSV在自然界的分子变异 与其地理分布具有密切的关系。此外，非编码区序列的高度保守性暗示着它们在病毒基因转录和复制的调控方面 具有重要的功能。本文还讨论了RSV的分子流行病学
摘要： 噬菌斑平板计数是微生物学理论研究与实际应用中常用的方法之一。但由于平板上噬菌斑与背景反差小， 而且往往出现几个噬菌斑相连，计算机识别时出现较大的误差，因此噬菌斑计数目前仍为人工方法。本文以 噬 菌体为材料，感染E．coli宿主细胞，获得噬菌斑。然后将噬菌斑制成电子图像。抽取图像中有代表性的区域，利 用分水岭算法对图像进行分割处理，将相连的噬菌斑分割成单独的噬菌斑，然后利用基于区域生长法进行计数， 结果与人工计数完全相同，表明我们建立的新方法可以用于噬菌斑计算机自动计数。
摘要：利用5 RACE 试剂盒对从中国不同地区、不同SARS患者体中分离的SARS．CoV基因组5 端序列进行 RT．PCR扩增，并将扩增产物克隆至T easy vector。扩增片段的序列测定结果表明：所分离的4株SARS．CoV基 因组5 端非编码区的核苷酸序列和其他国家和地区报道的序列基本一致，而且所形成二级结构也完全相同，但 与已知普通冠状病毒的差别较大。同时发现在依赖于RNA的RNA聚合酶起始密码子上游一197 nt处有冠状病毒 典型的转录调控核心保守序列5 -CUAAAC-3
摘要：利用依据马铃薯Y病毒(PVY)pl基因序列设计合成的一对引物YPl，YP2，以带毒烟草总RNA为模板，通过RT-PCR方法扩增得到了0．83kb的目的条带，测序结果表明为PVYpl基因。通过对PVY P1蛋白氨基酸序列分析发现PvY不同分离物间Pl蛋白氨基酸序列存在明显差异，氨基酸序列同源性在64％～94％间。依据Pl蛋白氨基酸序列建立了PVY系统关系树并对PVY进行了类型分析。
摘要： 噬菌斑平板计数是微生物学理论研究与实际应用中常用的方法之一。但由于平板上噬菌斑与背景反差小， 而且往往出现几个噬菌斑相连，计算机识别时出现较大的误差，因此噬菌斑计数目前仍为人工方法。本文以 噬 菌体为材料，感染E．coli宿主细胞，获得噬菌斑。然后将噬菌斑制成电子图像。抽取图像中有代表性的区域，利 用分水岭算法对图像进行分割处理，将相连的噬菌斑分割成单独的噬菌斑，然后利用基于区域生长法进行计数， 结果与人工计数完全相同，表明我们建立的新方法可以用于噬菌斑计算机自动计数。
对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus，wSSV)是对虾养殖业的主要病原， 自1992 年以来一直严重影响对虾的产量和质量，造成巨大 的经济损失。由于其宿主范围涉及几乎所有的水生 甲壳类动物，因此成为水生动物病毒研究领域重要 的病毒之一。在对虾白斑综合征病毒研究的过程 中，病毒的提纯是关键的一步。由于该病毒的囊膜 蛋白很容易降解，很难得到完整的病毒粒子。传统 的蔗糖密度梯度离心介质不仅会破坏病毒囊膜，而 且还会丢失大量的病毒粒子，从而不易得到大量 的、完整的病毒粒子[1]。曾经报道一些改良的提纯 技术可以得到纯度较高的核衣壳和病毒粒子， 为 WSSV 基因组研究奠定了良好的基础[2,3]。本论文 报道的是一种改良的、能大量获得完整病毒粒子的 蔗糖密度梯度提纯技术。
禽副粘病毒(Avian paramyxovirus，APMV)属于 副粘病毒科、副粘病毒亚科、腮腺炎病毒属，现已 确定有9个血清型(APMV．1-9)。APMV一1血清 型是禽类最重要的致病型，几乎所有禽种均对其敏 感⋯。该病毒是一种有囊膜的单股负链RNA病毒， 由囊膜、核衣壳和核酸组成；基因组全长约15kb， 编码两种囊膜糖蛋白(HN蛋白和F蛋白)和四种 结构蛋白一基质蛋白(M 蛋白)、核衣壳蛋白(NP 蛋白)、磷蛋白(P蛋白)、大蛋白(L蛋白)，此外 还编码两种非结构蛋白(36ku和33ku蛋白)口J； 各结构蛋白基因在基因组上的排列顺序为 3"-NP—P—M—F—HN．L．5 川。HN 糖蛋白具有血凝素和 神经氨酸酶两种活性，在发病过程中起着识别细胞 受体的作用；F糖蛋白则参与病毒的穿透、细胞融 合和溶血等作用。F蛋白和HN 蛋白具有良好的免 疫原性，用真核细胞表达系统表达的F蛋白和HN 蛋白免疫动物后， 对强毒的攻击具有一定保护作 用，因此两者常被用作研制基因工程苗的目的基因 [4,5]。本文根据GenBank下载的序列，合成引物， 就在云南省分离到的一株鹦鹉副粘病毒(编号 YN—PA01)，应用RT．PCR技术扩增F．HN基因全长 序列，并将其克隆至T载体上，然后使用引物步移 法(primer walking)进行序列测定，最后得出 w 基因全核苷酸序列。现将整个试验过程简报如下。 以期试验结果能为副粘病毒的相关研究提供一定 的理论依据。
噬藻体(Cyanophage)是一类感染蓝藻的病毒， 形态上同于噬菌体I ，近期的研究表明，噬藻体作 为水体环境中活跃的动态因子，在控制水体初级生 产力和有害藻类水华(Harmful Algal Bloom，HAB) 方面可能发挥着重要的作用【2’引，甚至影响水体生 态系统中食物链的结构【4】，因此研究水体中噬藻体 的生理生态学特性对于了解其生态功能是非常重 要的，但是由于自然水体中的噬藻体浓度往往较 低，难以直接对其进行定性或定量研究，所以对天 然水样中的噬藻体进行高效、快速的浓缩是研究噬 藻体生态地位和功能的关键和难点。超滤法是国际 上流行的浓缩自然水样中病毒的方法 ，引，但在我 国尚未见报道。基于超滤的原理，本实验室对超滤 法进行了改进，建立了一套能够有效浓缩水样中噬 藻体的方法⋯反冲超滤法，此法浓缩工艺简单，耗时短，费用低，效率高。
犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canineparvovirus，CPV)引起的一种多发于幼犬的致死性传染病， 主要表现为出血性肠炎和心肌炎⋯。在自然条件下本病多呈散发，而在养犬比较集中的地方则常群发[2】。目前，预防本病的方法主要依靠接种疫苗(包括灭活疫苗和弱毒疫苗)， 国内外已研制出多种灭活疫苗和弱毒疫苗。但不管是灭活苗、弱毒苗或亚单位苗，其研制都是以大量培养微生物为基础的，这不仅给疫苗的制造带来了局限性，同时在疫苗的安全性、免疫性能、产量及保存方面存在缺陷。在其弱毒疫苗的研制和使用过程中，对疫苗用毒种的选育和鉴定、毒种的遗传稳定性以及毒种有无被强毒株污染等鉴定中都急需一种能准确检测弱毒疫苗株和强毒株的方法。以往是通过接种易感动物，观察易感动物的临床症状、组织学变化来鉴定对易感动物的致病性，据此来鉴定强、弱毒株。此方法影响因素较多，准确性低。本研究根据文献报道的犬细小病毒弱毒疫苗株(CPV．bl14)的序列，同CPV强毒株(GenBank中发表的)的序列比较，发现疫苗株在高度保守的NS1区有较多的突变和基因缺乏，其中有l5个基因缺失发生在CPV的2040bp．2056bp之间。本试验利用弱毒疫苗和强毒株基因组的差异，设计特异引物通过PCR技术从分子水平来鉴定CPV的弱毒疫苗株和强毒株。
人冠状病毒1965年由Tyrrell等从人胎儿器官 培养(HET．OC)中最初分离。其后Hamre和Kapikian 等从组织培养中分离了病毒l4j。2003年4月，世界 卫生组织正式确认，引起这次非典型肺炎(国外称 为重症急性呼吸综合症，Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS)的病原体是冠状病毒的一个变种 SARS．CoV，以前没有在人体内发现过。继加拿大 和美国之后，中国科学院北京基因组研究所和军事 医学科学院微生物流行病研究所完成了SARS病毒 中国流行株的病毒全基因组核苷酸序列测定，证实 该病毒的基因序列与此前发现的冠状病毒存在较 大差异，属于一种新的冠状病毒L2J。本研究利用电 子显微镜负染色技术和超薄切片技术．分析了2003 年从湖北SARS患者血清中分离的冠状病毒的形态 结构及在其敏感的体外培养细胞中感染、复制、装 配过程
1998年，Fire ¨在研究控制线虫的基因表达 方法时，意外地发现由正义和反义RNA 退火形成 的双链RNA(double．stranded RNA，ds RNA)~Jl起的 基因表达的抑制程度远远高于单独应用正义或反 义RNA。并命名此现象为RNA 干涉(RNA interference，RNAi)。随后围绕此现象展开的广泛的 研究证实在昆虫、植物、真菌中也存在有同样的现 象，并且近来在脊椎动物细胞内也有了这方面的报 道I 引。众多结论证实这种由dsRNA介导的干涉现 象作为细胞一种防御机制，可针对性地降解细胞内 与之具有同源性的mRNA序列，一方面可令生物产 生对内源寄生性的核酸(如具转位可能的多种转位 子)或外源病原体的致病性核酸的抵抗，同时还可 调节细胞内编码基因的表达【4 】。由此可以推测其 为机体抗病毒的重要防御系统之一，在抗病毒感 染、特定基因功能研究及遗传表型分析等方面将有 着潜在的巨大应用价值。本文拟从RNAi的理论及 其在抗病毒感染中的潜在价值作一简要介绍。
39卷第1期 (2024年2月)
ISSN 1674-0769
EISSN 1995-820X
CN 42-1760/Q
主编: 石正丽
影响因子: 5.5*
*源于2022年JCR
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