2021年36卷3期

Human adenoviruses (HAdVs) are non-enveloped double-stranded DNA viruses which belong to the genus Mastadenovirus. To date, over 100 genotypes of HAdVs have been recognized and are classified into seven species (A–G). HAdVs are highly contagious that could cause multiple systemic infections, such as acute respiratory disease, epidemic keratoconjunctivitis, hemorrhagic cystitis, gastroenteritis, as well as other diseases. HAdVs-associated respiratory tract infection is one of the leading causes of severe respiratory tract diseases in pediatric populations, characterized by poor prognosis, high mortality, severe complications, and serious sequelae. However, there is no recommended effective drug for adenovirus infections. To further advance our knowledge on HAdVs, we dedicate a special topic covering the latest researches on clinical diagnosis, epidemiology, detection methods, vaccine development, and HAdV-associated severe diseases. The cover is modified from an electron micrograph of the rAd3H recombinant vaccine virus (kindly provided by Prof. Qiwei Zhang) with artistic processing. See page 354–364 for details.

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Review

孕期合并汉坦病毒感染

逯登辉, 姜弘, 连建奇

2021, 36(3): 345 doi: 10.1007/s12250-020-00300-8

收稿日期: 2020-01-25 录用日期: 2020-08-07 出版日期: 2020-10-19
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汉坦病毒感染是一项对全球健康的挑战,并引起了广泛的公众关注。近年来,许多国家都陆续报告了孕妇感染汉坦病毒的病例。临床诊治发现,与正常人感染汉坦病毒相比,被感染的孕妇及其胎儿似乎具有更严重的临床症状和较差的临床预后。因此,为研究孕妇感染汉坦病毒后的患病情况,本研究将就汉坦病毒在全世界范围内的流行病学分布、不同类别汉坦病毒穿透胎盘屏障的差异和影响孕妇及其胎儿感染汉坦病毒的发生率和临床结果的因素系统地进行综述。此外,本文还将讨论对孕妇感染汉坦病毒的诊断和治疗方法,并概述了相关进展。

Research Article

一种新型的人3型腺病毒复制缺陷型重组减毒疫苗候选株的构建及特性:腺病毒载体用于腺病毒疫苗

严雨茜, 京舒娉, 冯立强, 张静, 曾志伟, 李敏, 赵珊, 欧俊贤, 蓝文东, 管文艺, 吴晓薇, 吴建国, SetoDonald, 张其威

2021, 36(3): 354 doi: 10.1007/s12250-020-00234-1

收稿日期: 2020-02-22 录用日期: 2020-04-13 出版日期: 2020-05-26
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人腺病毒(HAdVs)传染性强,引起大量的急性呼吸系统疾病(ARDs)病例,具有较高的发病率和一定的致死率。在亚洲、欧洲和美洲,人腺病毒3型(HAdV-3)均是导致ARD暴发最常见的腺病毒型别。然而,目前还没有在普通人群中批准使用的疫苗。六邻体(hexon)蛋白含有腺病毒主要的中和表位,具有强大和持久的免疫原性。在本研究中,以基因治疗和疫苗载体研究中E1区缺失的复制缺陷型HAdV-5商品化载体为基础,我们构建了一种新型的重组减毒的人3型腺病毒疫苗候选株。利用细菌内同源重组的方法,将整个HAdV-3的六邻体基因整合到载体的E1区。在AD293细胞中成功包装出重组病毒,并表达HAdV-3的六邻体蛋白,随后用逆转录PCR、免疫印迹、间接免疫荧光和电镜观察等方法鉴定验证正确。这种潜在的疫苗候选株与野生型HAdV-3株在互补细胞系AD293内具有相似的复制能力。然而,更重要的是,疫苗候选株在AD293细胞中经20代以上的连续传代后,仍不能在人肺腺癌A549细胞中复制,持续保持其复制缺陷的特性,这表明该疫苗具有非常高的安全性。通过滴鼻或肌肉注射途径,该候选疫苗株免疫的小鼠均能产生较高滴度的针对HAdV-3的中和性抗体。因此,该重组、减毒且安全的腺病毒疫苗是一种很有发展前景的HAdV-3疫苗候选株。这种使用临床批准的复制缺陷型HAdV-5载体用于腺病毒自身疫苗研究的策略,为研发腺病毒疫苗提供了一种新的思路和方法,今后可用于引起呼吸系统疾病以及其它相关疾病的所有型别腺病毒的通用疫苗的构建和研发。

Freeze-Drying Formulations Increased the Adenovirus and Poxvirus Vaccine Storage Times and Antigen Stabilities

Ye Chen, Qibin Liao, Tianyue Chen, Yuchao Zhang, Weien Yuan, Jianqing Xu, Xiaoyan Zhang

2021, 36(3): 365 doi: 10.1007/s12250-020-00250-1

收稿日期: 2020-04-19 出版日期: 2020-07-21
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Successful vaccines induce specific immune responses and protect against various viral and bacterial infections. Noninactivated vaccines, especially viral vector vaccines such as adenovirus and poxvirus vaccines, dominate the vaccine market because their viral particles are able to replicate and proliferate in vivo and produce lasting immunity in a manner similar to natural infection. One challenge of human and livestock vaccination is vaccine stability related to the antigenicity and infectivity. Freeze-drying is the typical method to maintain virus vaccine stability, while cold chain transportation is required for temperatures about 2 ℃–8 ℃. The financial and technological resource requirements hinder vaccine distribution in underdeveloped areas. In this study, we developed a freeze-drying formula consisting of bovine serum albumin (BSA), L-glutamic acid (L-Glu), polyethylene glycol (PEG), and dextran (DEX) to improve the thermal stability and activity of viral vaccines, including vaccinia recombinant vaccine (rTTV-OVA) and adenovirus vaccine (Ad5-ENV). We compared a panel of five different formulations (PEG: DEX: BSA: L-GLU=50:9:0:0(#1), 50:5:4:0(#2), 50:10:9:0(#3), 50:0:0:9(#4), and 50:1:0:8(#5), respectively) and optimized the freeze-drying formula for rTTV-OVA and Ad5-ENV. We found that the freeze-drying formulations #2 and #3 could maintain rTTV-OVA infectivity at temperatures of 4 ℃ and 25 ℃ and that rTTV-OVA immunogenicity was retained during lyophilization. However, formulations #4 and #5 maintained Ad5-ENV infectivity under the same conditions, and Ad5-ENV immunogenicity had maximum retention with freeze-drying formulation #4. In summary, we developed new freeze-drying formulations that increased virus vaccine storage times and retained immunogenicity at an ambient temperature.

6种型别人腺病毒血清中和抗体流调揭示广州地区幼儿群体预存免疫水平低

田新贵, 樊晔, 王长兵, 刘振卫, 刘文宽, 许芸, 莫纯聪, 游爱萍, 李潇, 戎霞, 周荣

2021, 36(3): 373 doi: 10.1007/s12250-020-00307-1

收稿日期: 2020-06-29 录用日期: 2020-08-31 出版日期: 2020-11-09
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人腺病毒(HAdV)在全世界常导致多种疾病,如呼吸疾病、胃肠炎、膀胱炎等。人腺病毒3型、7型、4型及新发55型、14型是导致严重呼吸道疾病的最重要的几个型别,而目前临床上没有有效药物,也没有适应于普通人群的疫苗。为发展新型疫苗和腺病毒载体,及流行病学监测,有必要调查人腺病毒血清阳性率。本研究中,我们采集了广州市278位健康人的血清,年龄为0个月到49周岁(228位儿童和50位成人),进行血清中和抗体水平检测。在小于18岁儿童中,对HAdV-3和HAdV-7阳性率随年龄显著升高,在1–2,3–5,6–17岁年龄组中对HAdV-3阳性率分别为12.07%,33.96%和64.29%,对HAdV-7阳性率为0%,18.87%和19.05%;而对其它四种腺病毒阳性率非常低(0% ~8.1%)。在18到49岁的成人中,人腺病毒3型、7型、4型阳性率最高(> 50.00%),其次为人腺病毒14型(38.00%)、55型(34.00%)、11型(24.00%)。对人腺病毒4型和55型阳性的成人血清样品中和抗体滴度高,对55型阳性的样品对11型和14型一般也为阳性。这些结果提示在广州地区,幼儿群体缺乏抗所有6种腺病毒的预存免疫,而成人缺乏抗人腺病毒14型、55型、11型的预存免疫。本研究表明持续监测腺病毒型别、研发适用于儿童和成人的腺病毒疫苗非常重要。

我国部分地区人腺病毒7型的基因遗传分析

段亚丽, 李昌崇, 邓力, 安淑华, 朱云, 王巍, 张萌, 许黎黎, 徐保平, 陈祥鹏, 谢正德

2021, 36(3): 382 doi: 10.1007/s12250-020-00334-y

收稿日期: 2020-04-24 录用日期: 2020-10-10 出版日期: 2021-01-05
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目的

了解我国儿童急性呼吸道感染中人腺病毒7型(HAdV-7)的分子流行病学及遗传变异特征。

方法

选取 2014-2018年来自北京、河北、温州和广州地区的HAdV-7阳性的急性呼吸道感染患儿的呼吸道样本进行基因扩增和序列分析,共获得57个HAdV-7临床株的六邻体(hexon)、五邻体(penton base)和纤突(fiber)基因序列,随机选取17株毒株进行全基因组序列测定;应用生物信息学软件对获得的序列以及HAdV-7原型株(AY594255)、疫苗株(AY495969和 AY594256)和代表性的参考株进行系统进化和变异分析。

结果

基于全基因组序列、主要衣壳蛋白基因(hexon、penton base和fiber)序列和早期基因(E1、E2、E3和E4)序列所构建的系统进化树的进化分支结构并不完全一致,但本研究获得的HAdV-7临床株与世界范围内上世纪80年代至今的大部分流行株均位于同一进化分支。与HAdV-7原型株相比,本研究中的57个临床株在hexon基因的loop1和loop2主要中和抗原位点区域以及penton base基因的RGD loop区存在着一些氨基酸变异。全基因组序列重组分析显示本研究获得的HAdV-7临床株的55kDa protein和100kDa hexon装配相关蛋白基因分别是由HAdV-16和HAdV-3型重组而来。

结论

本研究获得的HAdV-7临床株具有较高的同源性,但其hexon基因的loop1和loop2主要中和抗原位点区域以及penton基因的RGD loop区存在着一些氨基酸变异,其意义有待进一步研究;HAdV-7临床株的55kDa protein和100kDa hexon装配相关蛋白基因部分区域分别是由HAdV-16和HAdV-3型重组而来。

基于系统进化树分析的基因分型在腺病毒暴发鉴别院内感染中的应用

杨传宇, 朱春梅, 钱渊, 邓洁, 张宝元, 朱汝南, 王芳, 孙宇, 陈冬梅, 郭琪, 周禹彤, 于磊, 曹玲, 赵林清

2021, 36(3): 393 doi: 10.1007/s12250-020-00299-y

收稿日期: 2020-05-14 录用日期: 2020-08-05 出版日期: 2020-10-01
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院内感染是儿科常见问题,对婴儿及免疫功能低下者可能致命。在2018年9月,首都儿科研究所附属儿童医院住院儿童中发现人腺病毒(HAdV)的高阳性检出率。为调查本次HAdV暴发是院内感染?还是社区感染?收集2018年6月至12月呼吸病房收治的急性呼吸道感染患儿呼吸道标本,进行呼吸道病毒筛查。在1840例患者中,95例(5.2%,95/1840)为HAdV阳性,81例进行了系统进化树分析,其中7例为HAdV-1(8.6%),30例为HAdV-3(37.0%),2例HAdV-6(2.5%),42例HAdV-7(51.9%)。8月(4.7%,12/255)、9月(15.0%,41/274)和10月(6.9%,17/247)采集到的HAdV阳性样本更多,9月达到高峰。将HAdV系统进化树分析结果与患者临床资料相结合,排除院内感染的有77例(4.2%,77/1840;81.1%,77/95);剩余的18例中8例可能是探视者或家长传播的;3例未得到HAdV序列,无法确定为HAdV阳性室友传播;另有1例因HAdV阳性室友未得到序列,无法确定是否为院内感染;有6例与室友具有高度同源的HAdV序列,考虑可能为院内感染。由此可见基于系统进化树分析的HAdVs基因分型结合临床资料,可为区分院内感染和社区获得性感染提供有力证据,尤其是在追踪院内感染起源时。

中国青藏高原野生动物中Beta和新delta冠状病毒的鉴定

朱文涛, 杨晶, 卢珊, 兰瑞庭, 金东, 罗雪连, 濮吉, 吴树声, 徐建国

2021, 36(3): 402 doi: 10.1007/s12250-020-00325-z

收稿日期: 2020-08-03 录用日期: 2020-09-27 出版日期: 2020-12-01
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一些能够引起全球流行的病毒感染越来越引起人们的关注。这些常见的新发与再发病原体中的有一类就是冠状病毒,比如SARS-CoV, MERS-CoV SARS-CoV-2。冠状病毒的宿主是野生动物,并且具有跨种传播的危险。然而,具有丰富生物多样性和高海拔的青藏高原地区,其冠状病毒的宿主调查很少有研究。本文,我们通过下一代高通量测序从玉树州的野生动物中获得了一种已知的beta冠状病毒和一种新的delta冠状病毒。进化分析显示,这个delta冠状病毒与冠状病毒HKU24种具有较高的核酸相似性。尽管它与Sparrow deltacoronavirus ISU42824 最相近,但是其S蛋白和Sparrow coronavirus HKU17只有73.1%的氨基酸相似性。这个新的delta冠状病毒的宿主是白腰雪雀,并且具有潜在的跨种传播潜力。据估算,这个新的delta冠状病毒与其种内其他冠状病毒最近共同祖先的分化时间是289年前。总之,本研究扩展了对beta冠状病毒和delta冠状病毒遗传多样性的认识,并且对冠状病毒宿主的认识提供了一个新的视角。

PTEN脂磷酸酶活性通过Akt/FoxO1/Maf1信号途径增强登革病毒的产生

刘彬, 高婷婷, 付晓宇, 徐铮昊, 任浩, 赵平, 戚中田, 秦照玲

2021, 36(3): 412 doi: 10.1007/s12250-020-00291-6

收稿日期: 2020-01-10 录用日期: 2020-07-31 出版日期: 2020-10-12
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登革病毒(DENV)属于蚊媒传播的病毒类病原体,严重威胁全人类的生命健康,但目前对于DENV-宿主相互作用介导病毒致病性的认识仍然十分有限。DENV可以劫持宿主的脂质代谢以进行病毒复制,其中脂滴(LDs)在病毒生命周期中起着关键作用。本研究中,我们揭示了10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)在LDs介导的DENV感染中的新作用。我们的研究表明,DENV感染后,PTEN通过转录后调节下调表达,而过表达PTEN则会增强DENV复制。进一步研究发现,PTEN脂磷酸酶活性可通过Akt / FoxO1 / Maf1信号途径减少细胞LDs的面积和数量,并联合细胞自噬,促进DENV复制和病毒产生。因此,本研究为脂质代谢与DENV复制周期之间的相互作用提供了新的见解。

通过靶向整合酶来抑制人免疫缺陷病毒基因组整合的嵌合体泛素连接酶

张作鹏, 袁森, 徐舒婷, 郭德银, 陈朗, 候炜, 汪敏

2021, 36(3): 424 doi: 10.1007/s12250-020-00311-5

收稿日期: 2020-03-14 录用日期: 2020-09-14 出版日期: 2020-11-13
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人免疫缺陷病毒(HIV)攻击人体免疫系统,并导致获得性免疫缺陷综合症(艾滋病)。联合抗逆转录病毒疗法(cART)治疗可抑制病毒生长并减缓疾病进展,但也会产生各种不良影响。泛素-蛋白酶体途径(UPP)通过诱导病毒蛋白降解,在宿主对包括病毒在内的病原体的免疫中发挥着重要作用。一系列重定向泛素连接酶(E3)的底物,以介导该底物被UPP降解的方法已经被成功建立。在本研究中,我们试图以已知的人类泛素连接酶为基础,通过将E3的底物识别结构域,替换为与病毒蛋白相互作用的宿主蛋白结构域,设计并构建了一系列嵌合体E3原型,以靶向HIV-1整合酶,并介导经由UPP的降解。经过评估筛选,146LI被鉴定为能够靶向HIV-1 NL4-3整合酶的嵌合体E3。随后,我们进一步优化146LI的设计,得到了146LIS (146LI short)。146LIS在本研究中被证明可以诱导HIV整合酶的lys48特异性多聚泛素化,并更有效地降低细胞中HIV-1 NL4-3整合酶的蛋白水平。采用CRISPR HDR技术构建的146LIS敲入淋巴细胞,在HIV NL4-3病毒感染时,表现出显著的病毒基因组整合程度降低,病毒复制减少,同时细胞毒性不明显。我们的研究成功地获得了能在体内外诱导HIV-1 NL4-3整合酶的lys48特异性多聚泛素化,在细胞内介导经由UPP的降解,从而抑制病毒感染后的基因组整合和病毒复制的嵌合体E3。

人副流感病毒3型磷酸蛋白SUMO化抑制病毒复制

程琪, 怀文静, 吴小艳, 陈明周

2021, 36(3): 438 doi: 10.1007/s12250-020-00314-2

收稿日期: 2020-09-11 录用日期: 2020-09-29 出版日期: 2020-11-16
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人副流感病毒3型(HPIV3)是副粘病毒科家族的一员,也属于不分节负链(nonsegmented negative-strand,NNS)RNA病毒家族。它会导致婴幼儿下呼吸道疾病。在过去的几十年里,尽管世界各地的研究人员已经多次尝试开发和测试临床活体减毒疫苗,但到目前为止依旧没有FDA认证的疫苗和特异性药物可用于预防或治疗HPIV3的感染。因此,在未来研究HPIV3的分子生物学机制为疫苗和药物的研发提供理论基础是迫在眉睫的。

HPIV3的磷酸化蛋白(P)是一个多功能蛋白,是病毒RNA聚合酶大蛋白(L)的重要辅助因子。病毒转录和复制过程中,在核衣壳蛋白(N)特异性识别病毒基因组RNA形成N-RNA模板的基础上,P蛋白招募L蛋白至N-RNA模板上启动病毒基因组的转录与复制。同时,P蛋白也可作为N蛋白的辅助因子与N蛋白结合,从而避免N蛋白的聚集以及N蛋白与宿主细胞RNA的非特异性结合,确保N蛋白与病毒RNA的正确结合。此外,P蛋白和N蛋白的相互作用是病毒转录复制场所-包涵体(Inclusion bodies,IBs)形成的必要条件。

SUMO化修饰作为一种翻译后修饰,影响许多重要的生物学过程、细胞因子以及通路,例如转录过程,染色质重塑,DNA损伤修复和细胞先天免疫。而许多病毒蛋白本身也通过自身的SUMO化修饰来调控病毒的感染周期。

在本研究中,我们发现HPIV3的P蛋白在细胞内可以被SUMO化,其SUMO化的位点是第492和532位赖氨酸残基,而突变体PK492R/K532R蛋白丧失了被SUMO化的能力。同时,PK492R/K532R蛋白相比野生型P蛋白增强了HPIV3微基因组报告系统的活性。在蛋白功能的研究中发现,PK492R/K532R蛋白与N蛋白的相互作用,PK492R/K532R蛋白寡聚化的能力,以及PK492R/K532R蛋白与N蛋白互作形成IBs的能力对比野生型P蛋白均没有明显变化。但在HPIV3反向遗传学研究中显示,P蛋白SUMO化功能缺失型重组病毒rHPIV3-PK492R/K532R比野生型HPIV3具有更强的感染能力。这一系列实验说明SUMO化修饰调控了P蛋白的功能并抑制了病毒的感染。

SOX5调节KSHV感染细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

袁武梅, 樊雅歌, 崔梦, 罗婷, 王亚娥, 舒占钧, 赵娟, 郑军, 曾妍

2021, 36(3): 449 doi: 10.1007/s12250-020-00313-3

收稿日期: 2020-07-01 录用日期: 2020-09-16 出版日期: 2020-11-24
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卡波氏肉瘤来源于血管上皮细胞,与卡波氏肉瘤相关病毒感染有关。SOX5在不同类型的肿瘤中具有不同的作用,然而它在KS中的作用报道较少。在本研究中,我们阐明了SOX5在KS组织和KSHV感染细胞中的作用,进一步分析了它作用的分子机制。本研究共纳入32名KS患者。检测了KS组织和瘤旁组织中的SOX5mRNA和蛋白的表达,显示KS组织和KSHV感染细胞中SOX5低表达,在KS早期患者中SOX5表达高于晚期患者。此外,SOX5过表达抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制KSHV感染细胞的迁移和侵袭。而且,我们研究发现SOX5过表达抑制KSHV感染细胞的上皮间质转化。这些结果暗示SOX5在KS发展过程中起抑制因子作用,可能是KS治疗中潜在的治疗靶点。

肿瘤坏死因子α通过抑制SNAP29介导的自噬溶酶体融合增加朊病毒蛋白水平促进肿瘤细胞的迁移

李欢, 王忍, 于泽, 师润, 张杰, 高山山, 邵明, 崔书中, 高振兴, 徐江, 施民新, 李朝阳

2021, 36(3): 458 doi: 10.1007/s12250-020-00320-4

收稿日期: 2020-08-12 录用日期: 2020-10-10 出版日期: 2020-11-25
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肿瘤坏死因子α是一种多效细胞因子,参与了炎性反应、免疫以及肿瘤的发生、发展。但是肿瘤坏死因子α对肿瘤恶性转化的生物学意义还没有完全阐明清楚。通过对恶性黑色素瘤细胞M2和肺癌细胞株A549的研究,我们发现肿瘤坏死因子α促进肿瘤细胞的迁移依赖于升高的朊病毒蛋白表达量。朊病毒蛋白表达量升高的机制是由于肿瘤坏死因子α激活了NK-κB从而抑制了FOXP3的转录和蛋白质水平,而FOXP3是SNAP29的转录因子。作为自噬体和溶酶体融合必需的蛋白,SNAP29表达水平的降低导致自噬溶酶体融合的减少。由于朊病毒蛋白的降解依赖于自噬溶酶体,因此,减少的自噬溶酶体降低了朊病毒蛋白的降解从而增加细胞膜表面朊病毒蛋白的量,并进而促进肿瘤细胞的迁移。靶向肿瘤坏死因子α-NK-κB- FOXP3- SNAP29这个信号通路可能抑制肿瘤扩散从而指导肿瘤的临床治疗。

稳定表达绿色荧光蛋白的报告型寨卡病毒系统的构建及抗病毒药物高通量筛选

张经伟, 王晗, 刘靖, 马乐, 华荣虹, 步志高

2021, 36(3): 476 doi: 10.1007/s12250-020-00316-0

收稿日期: 2020-07-31 录用日期: 2020-09-18 出版日期: 2020-11-24
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寨卡病毒感染可导致新生儿出生缺陷,还可导致格林-巴利综合征等疾病。针对该病至目前为止仍没有特异性治疗药物以及预防用疫苗。为了加快抗寨卡病毒的防治研究,本研究利用病毒反向遗传操作技术及稳定细胞系表达技术建立了一个稳定表达绿色荧光蛋白的报告型寨卡病毒系统,该系统提高了报告型病毒的可观测性以及稳定性。利用该报告型病毒系统建立了一种抗寨卡病毒药物高通量筛选方法。从包含974种天源植物来源的药物库中初步筛选出31种对寨卡病毒有明显抑制作用的药物。其中高三尖杉酯碱(homoharringtonine)、鸦胆子苦素(bruceine)、双氢青蒿素(dihydroartemisinin)和4洋地黄皂苷(digitonin)等四种药物对寨卡病毒的抑制作用最为明显。在BHK-21和A549细胞上进一步验证了四种药物的抗病毒效果。高三尖杉酯碱、鸦胆子苦素和双氢青蒿素三种药物对寨卡病毒的抑制均发生在病毒入侵细胞后阶段,而洋地黄皂苷则是在病毒入侵细胞的早期发挥作用。在这四种药物中高三尖杉酯碱和鸦胆子苦素是FDA批准的用于治疗慢性白血病药物,双氢青蒿素也是经批准上市的抗疟药物,这些已经上市的药物在安全性上已经得到广泛验证。本研究为寨卡病毒的潜在治疗药物研究提供了基础。

金银花提取物对甲型流感病毒的内体外药效及机制研究

李梦薇, 王鱼旭, 靳京, 窦洁, 郭青龙, 柯学, 周长林, 郭敏

2021, 36(3): 490 doi: 10.1007/s12250-020-00302-6

收稿日期: 2019-07-19 录用日期: 2020-09-11 出版日期: 2020-10-12
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甲型流感病毒,特别是H1N1,H3N2,H5N1和H7N9,对全世界的公共卫生构成了重大威胁。本研究共制备并研究了四种金银花提取物,包括酸提取物,类黄酮提取物,总提取物和酸-类黄酮复合物对流感病毒的抑制效果并鉴定有效组分。细胞病变抑制实验表明,所有金银花提取物均抑制流感病毒H1N1,H3N2和耐奥司他韦的突变株H1N1-H275Y的复制。金银花酸-类黄酮的组合具有比其他三种金银花提取物更好的抑制作用,对H1N1,H3N2和H1N1-H275Y的EC50值分别为3.8、4.1和> 20μg/ mL,在体外的抗病毒活性与奥司他韦和利巴韦林相当。金银花酸提取物(600 mg/kg/d)的口服给药可有效地将感染致死剂量H1N1的小鼠的存活率提高到30%,维持小鼠体重并减轻病毒性肺炎。分时段给药实验和神经氨酸酶(NA)抑制试验以研究抗流感病毒的机制,结果表明,金银花提取物在流感病毒的释放中起重要作用,对流感病毒NAs具有广谱抑制作用。金银花类黄酮提取物对流感病毒H5N1的NA抑制作用最强,IC50为54.7μg/ mL。综上所述,我们的研究结果表明,金银花的酸提取物和类黄酮提取物是主要的抗病毒活性成分,金银花的酸提取物有潜力开发为抗流感病毒(包括奥司他韦耐药病毒)的有效药物。

盐酸安他唑啉可作为一种抗HBV DNA分泌的抑制剂

李敬, 胡杨洋, 袁一菲, 赵怡楠, 韩琪琪, 刘粲誉, 胡雪, 周缘, 王云, 郭宇, 吴春晨, 陈新文, 裴荣娟

2021, 36(3): 501 doi: 10.1007/s12250-020-00306-2

收稿日期: 2020-03-26 录用日期: 2020-09-16 出版日期: 2020-11-09
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乙型肝炎病毒(HBV)属于肝病毒科,主要感染肝细胞,可引起急性或慢性肝炎。目前,有两种抗病毒药物被批准用于临床治疗慢性感染:干扰素和核苷(酸)类似物。然而,慢性感染的临床治愈仍然罕见,开发高效、安全、不易产生耐药、低毒的抗HBV药物对所有研究者来说都是一个巨大的挑战。盐酸安他唑啉是第一代抗组胺药,具有抗胆碱能特性,常用于缓解鼻塞和滴眼液。最近,我们建立了一个体外高通量评价体系,从FDA批准的药物库中筛选了近800种化合物,发现盐酸阿比多尔和盐酸安他唑啉可以有效降低细胞外上清中的HBV DNA,在HepAD38细胞中这两种药物的EC50分别为4.321 μmol/L和2.910 μmol/L。我们还还研究了盐酸安他唑啉在不同的HBV复制系统中的抗病毒作用及可能的作用机制。结果表明盐酸安唑啉对Huh7细胞胞外上清中的HBV DNA也有明显的抑制作用,EC50为2.349 μmol/L。这些发现为HBV药物的筛选和研究提供了新的思路。

Piperlongumine抑制Zika病毒的体外复制并促进HO-1表达的上调,暗示氧化应激的影响

陆维智, 史玲娟, 高静, 朱慧敏, 华颖, 蔡金泰, 吴闲波, 万成松, 赵卫, 张宝

2021, 36(3): 510 doi: 10.1007/s12250-020-00310-6

收稿日期: 2020-04-16 录用日期: 2020-08-25 出版日期: 2020-11-13
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鉴于目前寨卡病毒传播媒介蚊子的广泛分布,缺乏针对性疫苗和治疗的手段,以及人群对新发传染病缺乏免疫力等因素,寨卡病毒已经成为全球关注的公共卫生问题。新近研究发现寨卡病毒能够持续感染主要组成大脑皮层血脑屏障的人脑微血管内皮细胞进而感染脑组织,引起脑炎和胎儿脑垂体病等严重的脑组织损伤。本文研究发现,一种生物活性碱-荜茇酰胺(PL)具有抑制寨卡病毒复制的作用。通过沉默HO-1的表达以及使用活性氧清除剂NAC,能起到减弱PL对寨卡病毒复制的抑制作用。该研究结果提示PL是通过增加活性氧,引起细胞氧化应激反应,进而诱导HO-1的表达增加,从而起到抑制寨卡病毒复制的作用。我们希望通过本文的研究,为预防或治疗寨卡病毒的药物研究提供新的思路线索。

通过突变腮腺炎大型聚合酶蛋白中病毒mRNA帽甲基转移酶位点的腮腺炎疫苗候选株的研究

郝晓强, 汪一龙, 朱梦影, 周栋明, 刘容先, 王斌, 黄耀伟, 赵正言

2021, 36(3): 521 doi: 10.1007/s12250-020-00326-y

收稿日期: 2020-07-26 录用日期: 2020-10-20 出版日期: 2020-12-07
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尽管减毒活疫苗可用于控制流行性腮腺炎病毒(MuV),但流行性腮腺炎仍在世界范围内频繁爆发。减毒的MuV疫苗株S79在中国被广泛用于腮腺炎疫苗接种,但仍存在许多缺点,其中最突出的是副作用和免疫力下降。因此,需要进一步提高当前的MuV疫苗的安全性和效力。在本研究中,我们通过抑制病毒mRNA甲基转移酶(MTase)进一步致弱了MuV S79疫苗株。我们生成了八个重组MuV(rMuV),它们在大(L)聚合酶蛋白中的MTase催化位点或S-腺苷甲硫氨酸(SAM)结合位点携带突变。这些rMuV在遗传上是稳定的,与亲代疫苗株S79相比, 7个 rMuV在细胞培养物中的复制衰减, 5 个rMuV在棉鼠肺中的复制衰减。重要的是,接种了这些rMuV突变体的棉鼠产生了高水平的血清中和抗体,并完全保护其免受野生型MuV株(基因型F)的攻击。因此,我们的结果表明,MuV L蛋白中MTase催化位点或SAM结合位点的改变可提高MuV疫苗的安全性或免疫原性,因此mRNA帽MTase可能是开发新的MuV候选疫苗的有效靶点。

一种用于检测抗人腺病毒3型抗体中和活性的灵敏和高通量的基于流式细胞术的试验

刘振卫, 田新贵, 刘文宽, 冼钰婷, 陈伟略, 周荣

2021, 36(3): 537 doi: 10.1007/s12250-020-00295-2

收稿日期: 2020-01-18 录用日期: 2020-08-24 出版日期: 2020-09-29
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中和活性检测是中和抗体评价中重要的一环。传统的用于抗人腺病毒3型抗体中和活性检测的方法有微量中和试验和空斑试验。然而,微量中和试验灵敏度较低,而空斑试验不适合用于高通量筛选。在本研究中,我们描述了应用表达增强型绿色荧光蛋白的重组人腺病毒3型,建立基于流式细胞术的中和试验用于血清,细胞培养上清和嵌合抗体抗人腺病毒3型中和活性的检测。对于基于流式细胞术的试验,我们判定最佳细胞融合度选用90%,并应用流式细胞术对病毒进行滴定。通过使用一株纯化的嵌合抗体进行测定,我们判定所建立的基于流式细胞术的中和试验遵循百分比定律,并且最佳感染复数选用不小于5×10-4。此外,通过分别使用微量中和试验和基于流式细胞术的中和试验检测72份人血清抗人腺病毒3型中和抗体效价,结果显示两者的检测结果呈强相关。与微量中和试验相比,基于流式细胞术的中和试验观测周期从3天缩短为1天,数据分析更加客观并能自动进行。重要的是,新建的基于流式细胞术的中和试验可用于检测细胞培养上清中嵌合抗体的中和活性。因此,这种灵敏和高通的基于流式细胞术的中和试验可替代微量中和试验用于抗人腺病毒3型抗体中和活性鉴定和细胞培养上清中抗人腺病毒3型中和抗体筛选。

Letter

2018年西宁市人呼吸道腺病毒感染的分子特征研究

Juan Yu, Shengcang Zhao, Huaxiang Rao

2021, 36(3): 545 doi: 10.1007/s12250-020-00282-7

收稿日期: 2020-03-18 录用日期: 2020-08-05 出版日期: 2020-09-14
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腺病毒可导致人类呼吸道感染,目前青海省的腺病毒感染情况报道较少。我们前期研究表明,2016-2017年西宁市儿童中主要流行的腺病毒型别是HAdV-B和HAdV-C,其中HAdV-B3、HAdV-C1和HAdV-C2是最主要的分离株。本研究中,我们收集了2018年1-12月份西宁市1月~ 95岁流感样病例的鼻咽拭子样本1734份,对呼吸道腺病毒进行检测和基因分型。结果显示1734份鼻咽拭子中有86份腺病毒阳性,阳性率为4.96%,其中1-4岁儿童感染率较高。BLAST和系统发育分析显示,2018年西宁市流行株为HAdV-B、HAdV-C和HAdV-E,其中HAdV-B3、HAdV-C1和HAdV-C2为优势株。此外,我们还观察到一株含有HAdV-C1的hexon基因和HAdV-C2的fiber基因的重组毒株,提示腺病毒的流行是复杂的,其重组现象需要引起更多关注,并制定相应的防控策略。

儿童腺病毒塑型性支气管炎10例临床特征分析

曾令剑, 魏建华, 唐雨一, 刘恩梅, 李渠北, 臧娜

2021, 36(3): 550 doi: 10.1007/s12250-021-00394-8

收稿日期: 2020-11-02 录用日期: 2021-04-25 出版日期: 2021-06-22
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本研究回顾性分析了我院10例腺病毒塑型性支气管炎患儿的临床特征。其中男童4例、女童6例,发病年龄10月至15岁7月,中位年龄2.7(4.1)岁。均有发热、咳嗽症状,平均热程9.80±6.563天。呼吸困难8例,喘息5例,所有患儿均有病变肺部呼吸音降低,8例有肺部湿罗音或哮鸣音,并发呼吸衰竭8例、ARDS1例、肝功能损害5例、中毒性脑病2例、继发嗜血综合征1例;胸部CT均见肺实变或肺不张100%(10/10),50%(5/10)伴胸腔积液,4例患儿气道重建显示有支气管闭塞或显示不清;所有患儿镜下均取出塑型物,70%(7/10)累及单个肺叶,平均取出时间为发热后10.7±3.917天,50%(5/10)患儿需要机械通气治疗;8例患儿好转出院,2例患儿死亡,好转出院患儿2例有反复喘息。患者痰液和肺泡灌洗液均可检测出腺病毒。10名患儿的病原检测提示,腺病毒肺炎常见合并感染肺炎链球菌,未见感染支原体。两名患儿同时合并感染其他病毒。本研究提示,腺病毒肺炎可引起塑型性支气管炎,在出现呼吸困难特别是难以纠正的低氧血症伴肺部呼吸音减低、影像学肺实变/不张改变或气道重建提示异常时,需高度警惕腺病毒塑型性支气管炎可能,及时的气管镜治疗对疾病恢复及预后有重要作用。

2017年深圳腺病毒肺炎暴发流行回顾性研究分析

卢志威, 王和平, 鲍燕敏, 李志川, 张欢, 赵海霞, 郑跃杰

2021, 36(3): 555 doi: 10.1007/s12250-021-00393-9

收稿日期: 2020-07-02 录用日期: 2021-04-21 出版日期: 2021-05-27
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人类腺病毒(HAdVs)与呼吸、胃肠道、眼科、泌尿生殖系统和神经系统感染有关。HAdVs导致下呼吸道感染的儿童,往往预后差,死亡率高,并发症严重,后遗症严重。 本文回顾性分析2017年4月至7月在深圳市儿童医院诊断为腺病毒肺炎住院的患儿57例。分析患儿不同流行病学特征、临床表现、实验室检查、影像学资料和治疗结果,显示年龄小于两岁、外周血CRP、PCT升高、胸部CT出现肺不张以及肺外并发症的患儿,发生重症腺病毒肺炎的比例增高。塑型性支气管炎(PB)患儿组的发热时间以及住院时间与非PB患儿组比较显著缩短。PB患儿组胸部CT主要表现为节段性肺不张伴胸腔积液,而非PB患儿组胸部CT主要表现为双肺弥漫多发实变影。在深圳,春夏季为腺病毒肺炎流行高峰期,主要流行的型别为7型。当影像学检查显示肺不张和胸腔积液时,医生应考虑PB的可能,及时进行BAL治疗可缩短发热时间和住院时间。当常规方法分析病原失败时,应考虑采用支气管肺泡灌洗液样本和宏基因组新一代测序方法进行进一步分析。BAL联合甲泼尼龙抗炎治疗能否降低重症腺病毒肺炎患儿的死亡率和后遗症发生率仍需要大样本和前瞻性的临床研究。

SADS-CoV广泛的细胞嗜性暗示其潜在跨种感染风险

罗云, 陈颖, 耿蓉, 李贝, 陈静, 赵锴, 郑小双, 张玮, 周鹏, 杨兴娄, 石正丽

2021, 36(3): 559 doi: 10.1007/s12250-020-00321-3

收稿日期: 2020-07-15 录用日期: 2020-10-26 出版日期: 2020-11-17
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2016-2017年在中国广东造成2.4万多头仔猪死亡的罪魁祸首是一种源自于蝙蝠的新型冠状病毒。鉴于发病仔猪主要表现为急性腹泻和呕吐,我们将该病毒命名为猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)。 2018年和2019年SADS-CoV的疫情分别又在福建和广东报道,表明SADS-CoV仍对猪群构成严重威胁,并且与之高度相似的病毒(SADSr-CoV)仍在相应的蝙蝠种群中传播和流行。为了进一步评估该病毒的跨种风险,我们对来源于该病毒自然宿主(蝙蝠), 易感宿主(猪)已经潜在宿主(人和其他动物)的不同组织的细胞进行病毒敏感性测试。令人惊讶的发现是,SADS-CoV在体外具有广泛的宿主嗜性,它可以感染我们所有测试的20种细胞,并且该病毒在4种测试的人细胞中的复制效率高于四种测试的猪细胞,这突显了跨物种传播给人类的风险。据我们所知,SADS-CoV的细胞感染范围明显广泛于其他的已知的冠状病毒,包括SARS-CoV, MERS-CoV以及现在仍大流行的-SARS-CoV-2, 这意味着SADS-CoV再次跨种感染的风险很高。鉴于SARS-CoV、SARS-CoV-2和SARS-CoV的跨种传播引起的严重疾病,需要加强对SADS-CoV以及蝙蝠中SADSr-CoV监控,以防止今后的外溢事件发生。

RETRACTED ARTICLE: Human H9N2 Avian Influenza Infection: Epidemiological and Clinical Characterization of 16 Cases in China

Xuan Dong, Jiasong Xiong, Chaolin Huang, Jie Xiang, Wenjuan Wu, Nanshan Chen, Danning Wen, Chao Tu, Xueli Qiao, Liang Kang, Zhongzi Yao, Dingyu Zhang, Quanjiao Chen

2021, 36(3): 564 doi: 10.1007/s12250-020-00248-9

收稿日期: 2020-02-27 录用日期: 2020-06-01 出版日期: 2020-07-06
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39卷第1期 (2024年2月)

ISSN 1674-0769

EISSN 1995-820X

CN 42-1760/Q

主编: 石正丽

影响因子: 5.5*

*源于2022年JCR

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